Как видно из данных таблицы 2, через 96 часов после оплодотворения в культуральной среде присутствуют 2-х, 4-х, 8-ми, и 16-ти клеточные зародыши. Ранние и поздние морулы, а также ранние бластоцисты появляются через 120 часов. Через 192 часа в среде обнаруживаются поздние и экспандированные бластоцисты, а через 264 часа – вышедшие из зоны пеллюцида. Наличие в питательной среде на каждый конкретный момент времени эмбрионов на разных стадиях развития свидетельствует о не одномоментности оплодотворения яйцеклеток.
ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМОГО ОБОРУДОВАНИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И РЕАКТИВОВ (приложение 4)
-
Стереоскопический микроскоп. 2. Инвертированный микроскоп. 3. СО2 – инкубатор.
-
Микроцентрифуга. 5. Аналитические весы.
-
Сушильный шкаф. 7. Термостат. 8. Холодильник-морозильник. 9. Лабораторные столы. 10. Предметные и покровные стекла.
-
Химическая посуда (стаканы, колбы, цилиндры разного объема. 12. Микродозаторы на 1-10 мкл и 10-100 мкл. 13. Пробирки «Эпиндорф» объемом 1,5-2,0 мл.
-
Чашки «Петри» стеклянные и пластмассовые диаметром 90 и 40 мм.
-
Чашки культуральные 5-ти луночные.
-
Фильтры и фильтровальные мембраны.
-
Хирургические инструменты (ножницы, скальпели, зажимы, и др.).
-
Сосуды Дьюара (50 л, 20 л и 5 л). 19. Замораживатель эмбрионов.
-
Шприцы одноразовые ( 1 мл, 2 мл, 5 мл, 10 мл и 20 мл). 21. Спиртовки. 22. Вата хирургическая.
-
Маркеры. 24. Спирт.
ПОДГОТОВКА БОКСА И ПОСУДЫ
Накануне проведения работ в боксе проводится влажная уборка. За 2-2,5 часа до работы с яичниками столы, микроскопы и другое оборудование протирается 70% этиловым спиртом. Само помещение стерилизуется кварцеванием в течении 25-30 мин.
Стеклянная посуда перед использование моется в проточной воде с моющими средствами. Пластмассовая посуда сушится при температуре 55-600 С в сушильном шкафу, затем запаивается в полиэтиленовую пленку и ставится под бактерицидную лампу на 30-40 минут. Стеклянная посуда и хирургический инструмент после того, как он высохнет заворачивается в фольгу или же в пергаментную бумагу и стерилизуется в сушильном шкафу при температуре 160-1800 С в течении 30-40 мин. Рабочие среды готовятся заблаговременно накануне проведения работ с клетками. Среда для созревания должна перед использованием минимум 1 час находятся в СО2 инкубаторе. Среды для капацитации и оплодотворения минимум за 5 часов должны быть поставлены в СО2 инкубатор.
А. Яичники перед извлечением ооцит-кумулюсных комплексов
B. Ооциты до созревания
