ПОЛУЧЕНИЯ ООЦИТ-КУМУЛЮСНЫХ КОМПЛЕКСОВ
Ооцит-кумулюсные комплексы можно получать по двум направлениям.
Первое – получение ооцитов из яичников коров, убитых на мясокомбинате (для испытания и контроля питательных сред, отработки методик).
После убоя животного, яичники овариоктамируется с помощью ножниц, помещаются в один из растворов: физраствор, раствор Хенкса или же буфер Дюльбекко и при температуре 32-360 С доставляются в лабораторию (приложение 1, А). По нашим данным наилучшие время доставки - до 3 часов. При этом выход Мо-Вl составлял 19-27,3% от числа ооцитов поставленных на созревание. Увеличение длительности кратковременного хранения до 6,0 часов сокращает данный показатель на 9,8-13,2%, до 9 часов на 15,8-17,9%. Кратковременное хранение яичников свыше 9 часов при данной температуре исключает возможность получения эмбрионов на предимплантационной стадии развития.
Поэтому при доставке яичников в лаборатории через шесть часов и более желательно использовать раствор с температурой 20250 С. При это выход морул и бластоциста сохраняется на уровне 2126,8% (3,1-6,0 часов) и 18,2 и 22,2% при длительности хранения 9-12 часов.
В лаборатории яичники освобождаются от соединительной ткани и дважды промываются в свежем растворе, после чего начинается процедура выделения ооцитов. Она может проходить по следующим направлениям: надрез стенки фолликула, рассечение ткани яичников и аспирация (рисунки 2-4).
В наших опытах более эффективным по выходу жизнеспособных клеток оказался надрез стенок фолликулов - 53,4% против 46,3 и 49,2% при рассечении ткани яичников и аспирации. Однако из-за большей простоты и более высокого общего выхода ооцитов (на 31-31,8%) более приемлемым является рассечение ткани яичников.
ультразвукового зонда
