Уровень рН.
Обычно уровень рН среды должен равняться 7.2-7.4, что соответствует рН крови. Экспериментально было показано, что такая кислотность оптимальная для оплодотворения и предимлпнтационного развития эмбрионов. В качестве буферной системы обычно используется бикарбонатный буфер в присутствии 5% СО2 в атмосфере. Выбор на этот буфер пал в связи с тем, что он соответствует буферной системе крови, а парциональное давление СО2 в легких составляет 40 мм РТ. ст., что соответствует 5%. Для индикации рН используется феноловый красный, меняющий окраску с фиолетовой (через красную оранжевую) на желтую при закислении среды – изменении рН с 8,0 до 6,5. При рН 7,4 среда с таким индикатором приобретает характерный красно-оранжевый цвет.
Осмолярность .
Важной характеристикой среды является ее осмолярность, определяемая концентрацией и константами диссоциации ее компонентов. Обычно осмолярность равняется 285 м Осм/кг воды и соответствует таковой крови. Ооциты и эмбрионы млекопитающих обычно культивируется в открытых системах с максимально достигаемой влажностью (80-98% в зависимости от модели инкубатора), что предотвращает сильные колебания осмолярности в процессе культивирования.
Качество воды.
Основой любой культуральной среды является вода, качество которой во многом определяет успех культивирования. Для питательных сред используется вода, полученная после двойной дистилляции, ультрафильтрации либо дионизации. При этом необходимо соблюдение полной стерильности в процессе ее приготовления и хранения. Эндотоксины, выделенные бактериями, оставшимися в среде после ее ультрафильтрации, могут оказать токсическое взаимодействие на эмбрионы. То же может произойти и при попадании бактерий в среду в процессе ее хранения.
Ионный состав .
Ионный состав культуральных сред может сильно варьировать. Первые среды для культивирования ооцитов и эмбрионов млекопитающих представляли собой модификацию раствора Кребса и содержал ионы, необходимые для поддержания жизни клеток – Na+ , К+ , Са+2 , Mg+2 , PO43, и Cl-, растворенные в бикарбонатном буфере (НСО3).
Источник белка .
В качестве источника белка в основном используется бычий сывороточный альбумин, эстральная сыворотка или же сыворотка плодов коровы.
Энергетический субстрат .
Энергетическим субстратом для ооцитов и эмбрионов млекопитающих в культуральной среде обычно содержит пируват натрия, лактат натрия и глюкоза, при этом усвоение глюкозы начинается только после нескольких делений эмбриона. До этого основным источником энергии является пируват. Добавление аминокислот во многие культуральные среды объясняется их присутствием в жидкости яйцеводов. Однако при введении в среду аминокислот следует иметь ввиду, что не все они стабильны в условиях культивирования. При температуре 370 С многие из них разрушаются, образуя аммоний, который при накоплении в среде обладает токсическим эффектом.
ОТБОР ДОНОРОВ ООЦИТОВ
Донор - это животное высокой племенной ценности. Поэтому в первую очередь при его отборе учитывается молочная продуктивность, которая за ряд лактаций должна быть на 50-60% выше стандарта породы а в нашем случае не ниже 9000 кг молока за лактацию с содержанием жира не ниже чем 3,8% и белка не ниже 3,5%. Число учитываемых признаков может быть расширено и дополнительно включать такие показатели как пригодность к машинному доению, форма вымени, скорость молокоотдачи, крепость конституции, экстерьер и т.д. Племенная ценность донора наряду с оценкой собственного генотипа должна подтверждаться соответствующими показателями родителей и ближайших родственников.
