соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который тщательно закрепляют фиксатором. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца на поршень: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом.
Оттаивание спермы в пайеттах («французская соломинка»). Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку за запаянный конец, встряхивает ее 2 раза, чтобы удалить остатки азота в текстильной пробке, и быстро погружает в термостат для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота из текстильной пробки и предупреждает возможное выдавливание пробки из соломинки. Канистру с семенем опускает в азот. Сосуд закрывает крышкой.
Оттаивать соломинку необходимо в течение 10 с при температуре 38°С, перемещая круговыми движениями в воде.
Затем соломинку извлекают из термостата, тщательно осушают стерильной марлевой или бумажной салфеткой. Проверяют запись клички, номер быка и местонахождение пузырька воздуха (должен находиться с той стороны соломинки, которая запаяна в лаборатории). Поршень шприца оттягивают на 12 см (стержень поршня слегка искривлен, что удерживает его в одном положении). С помощью фильтровальной бумаги или стерильной марлевой салфетки необходимо согреть полость (камеру) шприца, установить соломинку со стороны текстильной пробки в полость (камеру) шприца. Конец соломинки со стороны запайки обрезают в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который закрепляют навинчиванием. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом на подвижность.
ВНИМАНИЕ! . Следует соблюдать принцип постепенного прогрева и избегать охлаждения спермы в ходе выполнения операции. А
• От момента оттаивания до введения спермы животному должно проходить не более 10 мин.
Процесс оттаивания семени в соломинках
Извлечение спермы, замороженной в соломинках, проводится стерильным корнцангом. Процесс должен происходитьв горл овинесосуда Дьюара и длиться не более 5 с. Перепады температуры во время извлечения замороженной спермы снижают ее качество
Оттаивание спермы в соломинках происходит при температуре 38-40°С в течение 8-10 с. Соломинку после оттаивания необходимо насухо вытереть марлевой салфеткой и, держа за конец, встряхивать, чтобы воздушный пузырек опустился к пробке
После заправки соломинки в осеменительный инструмент (А) необходимо отрезать ее конец с помощью стерильных ножниц (Б) и надеть санитарный чехол (В)
После надевания стерильного чехла на осеменительный инструмент поршнем вытравливают остатки воздуха из соломинки до появления капельки спермы, которую используют для оценки качества
Оценка активности спермы
Подвижность оттаянной спермы определяется при увеличении микроскопа 120-180 раз на термостатируемом столике при температуре 38-40°С.
На подогретое предметное стекло из осеменительного инструмента техник наносит небольшую каплю спермы. При использовании спермы в соломинках стеклянной палочкой рядом помещает каплю 2,9%-ного цитрата натрия, смешивает и накрывает подогретым покровным стеклом. При использовании спермы в облицованных гранулах, оболочка которых выполнена из прозрачного полимерного материала, качество спермы оценивают перед осеменением животных без предварительной разгерметизации спермодозы. Для этого гранулу, предварительно протерев стерильной салфеткой, размещают на предметном стекле и прижимают вторым предметным стеклом с помощью специального зажима. Участок гранулы, расположенный между стеклами, подводят под объектив микроскопа и оценивают сперму.
41
