Необходим термически изолированный ящик с крышкой, размером примерно 39 см в длину, 34 см в ширину и 25 см в высоту. Также необходимы деревянные блоки, сетка, алюминиевая рама, размером 11 см, 7 см и 2 см соответственно. Алюминиевая рама на деревянных блоках и сетка достигнут, по отношению к нижней части ящика, 20 см в высоту (1 уровень). При удалении сетки высота алюминиевой рамы на деревянных блоках достигнет 9 см (2 уровень).
Жидкий азот наливают в ящик до достижения 6 см высоты от дна. Накройте его на несколько минут до окончания «закипания» и пока не охладится внутренняя часть. После просушки соломинок их располагают горизонтально на алюминиевой раме, при этом они не должны касаться друг друга.
Соломинки на раме помещают внутри ящика на 1-м уровне на 2 минуты. Затем ящик открывают и соломинки помещают на 3 минуты на 2-й уровень (после удаления деревянных блоков).
Наконец, соломинки выливают в жидкий азот и помещают в канистры в термос с жидким азотом.
i) Размораживание и оценка партии спермы
Сперма размораживается как описано выше (см.: Обращение с замороженной спермой). После оценки 10% замороженных доз решается вопрос принятия или непринятия партии. Должны быть выполнены несколько исследований одной и той же соломинки или гранулы.
Через 5 минут после инкубации при температуре 36ºC подвижность сперматозоидов оценивается при 100-кратном увеличении с использованием разогретого предметного стекла над термической пластиной. Капля спермы помещается между нагретым предметным стеклом и крышкой для определения процента живых сперматозоидов и прогрессивной индивидуальной подвижности (скорость перемещения вперед живых сперматозоидов: минимум 0, максимум 5).
Для принятия семенной партии, соломинки или гранулы должны иметь:
-
a) Масал-подвижность после размораживания. b) Долю живых сперматозоидов, превышающую 30%. c) Прогрессивную индивидуальную подвижность равную или превышающую 2,5.
-
j) Размораживание спермы для искусственного осеменения
Размораживание осуществляется на водяной бане при температуре 36ºC. Содержимое каждой соломинки или гранулы выливается в гемолитическую пробирку и набирается в шприц для осеменения.
Приложение: Протокол по козам в отношении замораживания спермы
| Номер | Объем | Концентрация | Всего | Всего | Количество | Общий | Объем | Объем | Объем | Объем |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| самца | эякулята | сперм-в | сперм- | сперм- | доз | объем | разбавителя | раствора | раствора | B/3 |
| в | в x 0.9 | A | B | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
1. Номер животного
2. Объем эякулята
3. Концентрация сперматозоидов
4. Общее количество сперматозоидов: Объем эякулята х Концентрация
- сперматозоидов
5. Общее количество сперматозоидов х 0,9
6. Количество доз для осеменения:
Общее количество сперматозоидов х 0,9 / Количество сперматозоидов на дозу
7. Общий объем (эякулят + разбавитель): Количество доз для осеменения х
Объем дозы
8. Объем разбавителя: Общий объем – Объем эякулята
9. Объем раствора A: Объем разбавителя / 2
10. Объем раствора B: Объем разбавителя / 2
11. Объем раствора B / 3
