Искусственное осеменение коз

рассматривают при 100-кратном увеличении. Понятие качества спермы оценивается по силе волнообразных движений (подвижности сперматозоидов) на основе того, как формируются и исчезают волны. Подвижность оценивается по субъективной шкале (минимальная: 0; максимальная: 5) на основании силы движения. Сперму замораживают только тогда, когда подвижность сперматозоидов равна или превышает 4.

Сперму необходимо постоянно защищать от резких изменений температуры, от контакта с водой или прямой солнечной радиацией, от попадания примесей. Таким образом, все материалы должны быть чистыми, сухими и поддерживаться на уровне температуры спермы.

c) Определение концентрации сперматозоидов

Этот процесс осуществляется в камере Neubauer. При загрузке камеры для подсчета сперматозоидов, должны быть предприняты следующие шаги:

• Прилепите крышку предметного стекла к камере путем увлажнения краев вазелином или слюной, плотно прижимая ее к камере. При достижении хорошего слипания, из-за дифракции света по краям крышки появятся «Кольца Ньютона».

• Наберите (аспирируйте) сперму в красную корпускульную модельную пипетку, у которой должен быть умеренный и совершенно сухой наконечник, пока не будет достигнута отметка 0,25.

• Очистите наконечник пипетки, стараясь не изменить уровень спермы.

• Аспирируйте разбавитель (это может быть обычная вода) до отметки 101.

• Закройте оба конца пипетки пальцами и осторожно потрясите горизонтально около 30 раз.

• Удалите первоначальные капли.

• Поместите наконечник пипетки на край крышки предметного стекла и дайте камере заполниться в соответствии с капиллярностью. Жидкость не должна превысить боковые углубления, не должны остаться пузырьки воздуха или пустое пространство.

• Подождите несколько минут до начала счета.

Камера также может быть заполнена микропипеткой, используя 5 микролитров спермы, разбавленных в 2 см³ воды.

Поместите камеру для ее изучения в микроскоп (имеющий от 100кратного до 200-кратного увеличения). Если распределение сперматозоидов не является однородным, то повторите процесс загрузки. Количество сперматозоидов на большой площади (без внутренних разделений) считается на квадрант, и счет повторяется в случайно выбранном квадранте, пока в общем не будет подсчитано 5 квадратов. Концентрация сперматозоидов на 1 см³ рассчитывается путем умножения общей суммы в 5 квадратах на 12 800 000.

d) Центрифугирование спермы при помощи моющего раствора

Семенная плазма у коз имеет определенные особенности состава. Одним из них является наличие белковой фракции (BUIII), производимой бульбоуретральными железами, которая взаимодействует с молочным разбавителем и вызывает подавление подвижности сперматозоидов. Для того, чтобы избежать негативные последствия этой фракции, необходимо «промыть» сперму, отделить и удалить семенную плазму путем центрифугирования до этапа смешения спермы с разбавителем.

2,8% раствор натрия цитрата (2,8 г натрия цитрата в 100 мл дистиллированной воды) может быть использован в качестве моющего раствора. рН раствора должен быть от 6,8 до 7,2. Должен проводиться периодический контроль рН-фактора моющего раствора и разбавителя.

Для разбавления семенной жидкости добавьте 10 мл моющего раствора и центрифугируйте в течение 10 минут при скорости в 2000 об/мин. Удалите всплывающую жидкость пипеткой, а затем повторите операцию так, чтобы большая часть спермы, выпавшая в осадок в нижней части трубки центрифуги, была растворена в моющем растворе. Раствор натрия цитрата должен быть добавлен при той же температуре, что и температура спермы. Поэтому первое промывание осуществляется при 36ºС, а второе, из-за снижения температуры во время центрифугирования, при 20-25ºС (лабораторная температура).

e) Первое разбавление (добавление раствора А)

Объем разбавителя для добавления в сперму рассчитывается на основе показателей, содержащихся в приложении. Из-за удаления семенной плазмы после центрифугирования, 10% вычитается из общего числа сперматозоидов, рассчитанных в эякуляте (потеря сперматозоидов при удалении всплывающей жидкости). Разбавитель А добавляется при температуре 20-25ºC.

f) Снижение температуры и время стабилизации при 5ºC

Как только разбавитель А добавлен, разбавленная сперма охлаждается с температуры разбавления до температуры 5ºC. Охлаждение производится со скоростью 2ºС за 3 минуты. Разбавленная сперма должна оставаться при этой температуре в холодильнике в течение 45-60 минут перед добавлением разбавителя B.

g) Второе разбавление (добавление раствора B)

Разбавитель B добавляется 3 равными фракциями, с 10-минутными интервалами, и смешивается каждый раз до однородности. Рекомендуется помещать пипетку в холодильник до проведения разбавления. Через десять минут после добавления последней порции раствора B сперма готова к заморозке.

h) Подготовка спермы к заморозке

Сперма может быть заморожена в соломинках в парах жидкого азота (при температуре -196ºC) или в сухих ледяных гранулах (твердый диоксид углерода при температуре -79ºC). Сперма, замороженная одним из этих двух методов, хранится в термосе с жидким азотом. Процесс замораживания в гранулах легче, чем в соломинках, но последние легче использовать индивидуально и ими легче манипулировать во время искусственного осеменения.

Важно проводить замораживание в условиях низких температур, а также обеспечивать однородные дозы спермы для получения схожего семенного качества. Особое внимание требуется при определении различных партий.

1. Замораживание спермы в гранулах

Для замораживания спермы в гранулах требуется блок сухого льда с плоской поверхностью. При помощи гвоздей, подогретых на пламени, на его поверхности формируются ячейки.

Сперму вынимают из холодильника на водяной бане при температуре 5ºC. Другой контейнер с оставшимся разбавителем, в качестве хладагента, используется для хранения стеклянных пипеток при низкой температуре.

Как только сперма аспирируется в пипетку, по 0,25 мл (± 4 капли) помещается в каждую ячейку, быстро и последовательно, стараясь не задерживаться более чем на минуту между первой и последней гранулой. Дозы спермы находятся там в течение 1-2 минут, пока их поверхность не станет непрозрачной. Затем они переносятся в термос с жидким азотом.

2. Замораживание спермы в соломинках

Соломинки, поливинильный спирт и шприц с 1,5 см иглой хранятся в холодильнике до проведения замораживания. Соломинки заполняются посредством аспирации через тройной тампон (вата – поливинильный спирт – вата); при этом конец, свободный от тампона, помещается в сперму. Соломинки держат за тампонированный конец (во избежание того, что тепло рук повлияет на качество спермы). Поливинильный спирт в тройном тампоне застудневает и герметизируется при прикосновении его с аспирированной спермой. Соломинки сушат при помощи поглощающей бумаги, и воздушное пространство длиной 1,5 см образуется на свободном от тампона конце при помощи шприца с соответствующей иглой. Этот конец затем герметично закрывается путем мягкого, вертикального постукивания по месту, содержащему поливинильный спирт. Затем соломинки немедленно погружаются в контейнер с водяной баней при температуре 5ºC.