его вверх и вниз, смешивая сперму с раствором хлористого натрия. Затем из смесителя выпускают 4-5 капель. Кончик смесителя обтирают салфеткой, после чего наносят каплю на среднюю пластинку камеры. По щелевидным капиллярам сперма | проникаетсетке не было под пв о здушкров н оеых стекло.пузырей. пFiПодсчет ВАЕМаВАНАсперматозоидов eee | ведут при увеличении в 400-600 раз. Камеру устанавливают на столик микроскопа так, чтобы в поле зрения помещался один большой квадрат. Сперматозоиды подсчитывают в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали сетки. Кон| центрацию сперматозоидов всех видов сельскохозяйственных животных, выраженную в миллиардах в 1 мл, вычисляют по | упрощенной формуле путем деления числа сперматозоидов, | подсчитанных в 80 малых (пяти больших) квадратах, на 1000. Например, число сперматозоидов жеребца в пяти больших квадратах 176. В этом случае концентрация сперматозоидов составляет 0,176 млрд/мл (или 176 млн/мл).
При отсутствии необходимого оборудования концентрацию спермиев жеребцов можно определить по стандартам, разработанным Всероссийском научно-исследовательским институтом коневодства. Стандарты представляют собой набор запаянных пробирок одинакового диаметра, толщины стенок и прозрачности с жидкостью, имитирующей сперму ребца различной концентрации: 10, 50, 100, 200, 300 и 500 млн спермиевв 1 мл спермы. Определение концентрации спермиев жеребца по стандартам проводят следующим образом: сперму наливают в прилагаемую к стандартам пустую пробирку и сравнивают с двумя пробирками стандарта. Предварительно стандарты встряхивают, чтобы равномерно размешался осадок. Пробирки просматривают на свет, приложив к ним стеклянную палочку, при этом подбирают стандарт, наиболее близкий по мутности к определяемой сперме. Концентрация может быть определена и как промежуточная между двумя стандартами, например 75 млн (между 50 и 100 млн) и так далее.
Оценку подвижности спермы проводят с помощью микроскопии при температуре 38-40°C, используя специальный обогревательный столик (столик Морозова). Для этого на подогретое предметное стекло наносят стерильной палочкой или пипеткой каплю спермы, накрывают ее чистым покровным стеклом и просматривают под микроскопом при увеличении в 200-300 раз и неярком освещении. При нагревании сперматозоиды начинают двигаться не сразу, поэтому для объективной оценки качества спермы ее надо наблюдать иногда до 1-2 мин, пока сперматозоиды проявят наибольшую подвижность. При этом следует брать большую каплю спермы, так как при 3840°С малые капли быстро высыхают, отчего сперматозоиды погибают.
Подвижность сперматозоидов оценивают по десятибалльной шкале. В поле зрения микроскопа глазомерно определяют количество сперматозоидов с активным прямолинейнопоступательным движением в процентах к общему числу перматозоидов. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой все 100 % сперматозоидов имеют прямолинейнопоступательное движение, 9 баллов - примерно 90 %, 7 баллов - 70 % сперматозоидов и т.д. Полное отсутствие сперматозоидов в поле зрения обозначается буквой А (азоспермия). Если в поле зрения все сперматозоиды находятся без движения, то такое состояние обозначается буквой Н (некроспермия).
Важным условием в оценке качества спермы является ее переживаемость вне организма. Этот показатель определяют следующим образом: после оценки подвижности спермы под микроскопом в две стерильные пробирки (пенициллиновые флаконы) емкостью 20 мл наливают по 1 мл свежевзятой спермы, в каждую из которых добавляют по 3 мл ЛХЦЖ-среды. Coстав этой среды приведен ниже. Параллельное исследование (в двух пробирках) ведут для получения результатов большей точности. Пробирки закрывают пробками и переносят для хранения в холодильник или термос со льдом (температура 2-4°С).
Через каждые 12 часов производят контроль активности движения сперматозоидов под микроскопом до полного прекращения их поступательного движения. В специальный журнал записывают дату, часы просмотра и оценки активности сперматозоидов в баллах. На основании записей подсчитывают переживаемость сперматозоидов в часах. При ее вычислении берется время от начала наблюдения до момента установления колебательного движения или гибели всех сперматозоидов, и из полученной суммы вычитают половину времени между предпоследним и последним наблюдениями. Это делается потому, что активное прямолинейно-пеступательное движение прекратилось в промежутке между просмотрами. Показатели переживаемости сперматозоидов значительно варьируют по отдельным жеребцам и в среднем составляют 140-190 часов.
2.8 ЯАДВАВЛЕНИЕ ИХРАНЕНИЕ GEREN 2.3.1 РАЗБАВЛЕНИЕ Хранение спермы становится возможным после его разбавления и охлаждения.
Для разбавления спермы жеребца предложено несколько разбавителей, которые готовят непосредственно перед получением спермы. Предназначенные для разбавителя спермы компоненты должны иметь категорию очистки не ниже ХЧ (химически чистые) и их следует сохранять в полном соответствии с условиями, обозначенными на этикетке.
Каждая новая партия применяемых для приготовления разбавителей химических препаратов должна быть проверена. на безвредность для спермиев жеребца. Компоненты (вещества), входящие в состав искусственных сред, отвешивают на аналитических или аптекарских весах. Перед отвешиванием реактивов проверяют точность весов, затем спиртовым (96°) тампоном протирают правую чашку весов.
