помещают на держатели. Последние вместе с поплавками переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в жидкий азот и контейнер закрывают крышкой (расстояние от пакетов до жидкого азота должно составлять 1020 мм) и через 5 минут пакеты опускают в жидкий азот на хранение.
2.4.3. ТЕХНОЛОГИЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ОБЪЕМОМ 5 МЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ДИАЛИЗА Свежеполученную сперму фильтруют, измеряют объем и переносят в диализатор. Диализатор представляет собой емкость, состоящую из 2-х камер, разделенных полупроницаемой мембраной. В качестве мембраны используют гидратцеллюлозную пленку ОБ-20 или импортную пленку типа "купрофан". Мембранную пленку закрепляют резиновым кольцом на цилиндре так, чтобы она свисала мешочком, образуя внутреннюю камеру, куда помещается свежевзятая сперма. Камеру со спермой помещают в сосуд, содержащий диализный раствор. В качестве раствора используют ЛХЦЖ-среду, в соотношении 1:4. Желток вводят непосредственно в сперму в количестве 3 мл или 2гна 100 мл. При этом желток предварительно растворяют в равном объеме 11 % раствора лактозы и затем приливают к сперме. Диализная обработка длится 4 часа, из них 2 часа при комнатной температуре (18-20°С) и 2 часа при температуре 2-4°С в бытовом холодильнике. В течение этого времени диализатор необходимо периодически встряхивать, чтобы диффузия веществ шла быстрее. Затем сперму из диализатора переливают в подготовленные алюминиевые пакеты по 5 мл, замораживают по представленной выше схеме.
24.4 ХРАНЕНИЕ ЗАМОРОЖЕННОЙ СПЕРМЫ
Для постоянного длительного хранения в жидком азоте консервированной спермы используют стационарные хранилища для биопродуктов емкостью 500-600 л. Для непродолжительного хранения замороженную сперму жеребцов желательно хранить в сосудах Дьюара с диаметром горловины 88 мм: СДСТ-35, СДСТ-35М, СДП-35/90 (НПО Гелиймаш) или в сосудах СДС-50, СДС-20, СД-50М, СД-20М (Харьков) и др. Для транспортировки выпускаются маленькие сосуды Дьюара СДС-6, СДС-6М, СДС-16. При перевозках сосуды должны быть зафиксированы, во избежание их опрокидывания. Необходимо следить, чтобы уровень жидкого азота не опускался ниже заложенных на хранение доз спермы. We кая технология позволяет хранить сперму много лет. Но при этом не допускается преждевременное оттаивание и повторное замораживание спермы. Даже кратковременное повышениекачестве спермы,температурыпоэтомудодо-125°Сиспользованиявредно отражаетсянеобходимона хранить сперму в жидком азоте постоянно. Нарушение этого правила приводит к снижению качества спермы и потере ее оплодотворяющей способности.
2.4.5 ОТТАИВАНИЕ КРИОКОНСЕРВИРОВАННОЙ СПЕРМЫ
На основании ГОСТа 24168-80 (Сперма жеребцов замороженная) сперма после оттаивания, сохраненная не более 15 минут, должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 6.
В стерильную стеклянную колбу или мензурку наливают 100 мл дистиллированной воды, добавляют глюкозу или лактозу. Содержимое подогревают до закипания и взбал-
тывают до полного растворения осадка. После охлаждения раствора до 30-35°С отвешивают и добавляют в среду остальные компоненты. При оттаивании доз спермы, замороженных в алюминиевых пакетах объемом 15-20 мл, их быстро переносят пинцетом из жидкого азота в водяную баню при температуре 40-42°С и выдерживаютв ней в течение 50-60 секунд. Затем пакеты насухо протирают чистым полотенцем, обеззараживают спиртовым тампоном и открывают один конец пакета (можно отрезать стерильными ножницами) Сперму, замороженную в малых объемах 5-6 мл, оттаивают в Bogsной бане в течение 30 секунд.
Если сперма расфасована в соломины, то ее выдерживают при температуре воды 37°С в течение 30 секунд. На одну дозу расходуется от 2-х до 12 соломин (Тишнер, 1999), которые после оттаивания ставят в стаканчик и обрезают верхний кончик, затем переворачивают и отрезают второй кончик. При этом сперма выливается в стаканчик, откуда ее насасывают в одноразовый шприц. Перед осеменением сгущенную с помощью 6sприфугирования или посредством диализа ar Heo 08 man) доразбавить. Для этого к дозе (один пакет объемом 5-6 мл) добавляют молоко до 20 мл. Молоко готовят следующим образом - полученное от
Молоко готовят следующим образом - полученное от кобылы молоко необходимо процедить, довести до закипания и остудить. Температура молока для доразбавления должна быть 37°С.
Размораживание и доразбавление криоконсервированной спермы проводят непосредственно перед осеменением.
