В последнее время зарубежные фирмы-поставщики («Minitube», Германия или «MV», Франция) предлагают готовые среды для вымывания и эмбрионов лошадей в удобных упаковках, которые можно присоединять к промывному катетеру. В продаже имеются также готовые среды для краткосрочного хранения эмбрионов, расфасованные по 10-20 мл.
4.7 ИЗВЛЕЧЕНИЕ ЭМБРИОНОВ ИЗ МАТКИ КОБЫЛ-ДОНОРОВ Эмбрионы с целью их последующей пересадки вымывают из матки кобыл-доноров через 8-8,5 суток после овуляции. Работы по извлечению зародышей необходимо проводить в следующей последовательности: 1. Кобылу-донора заводят в станок, фиксируют. Освобожшку от каловых масс. Проводят ту. дают ее прямую кишку Fi илежа ИХ КНИМ алет наружных половых органов и пр Lu . Хвост бинтуют, либо помещают наружных покровов туют, в специальный полиэтиленовый чехол одноразового пользования и привязывают к верхней перекладине станка. . 2. Исполнитель одетой в обработанную УФ-облучением одноразовую полиэтиленовую перчатку рукой вынимает из стерилизатора катетер. Помощник через воронку ополаскивает его изнутри приготовленной промывной жидкостью. Исполнитель надевает на руку, сжимающую головную частью катетера, защитный полиэтиленовый чехол. Концевую часть чехла он забирает в горсть, закрывая катетер снаружи, и, придерживая пальцами руки, отрезает кончик чехла, обеспечивая в нем отверстие. 3. Исполнитель вводит рукус катетером во влагалище кобылы, | разъединяет пальцы руки, расправляя чехол, и проталки| вает г.оловную часть инструмента через отверстие чехлав цервикальный канал, а затем в тело матки до тех пор, пока латексный баллон катетера He пройдет за шейку матки.
| || | |
-
С целью фиксации инструмента в матке, помощник шприцем через специальный воздушный канал накачивает в раздуваемый баллон катетера 60 мл воздуха, запирая цервикальное отверстие изнутри, и перекрывает воздушный канал катетера зажимом. После этого катетер следует чуть потянуть наружу, чтобы баллон плотно прилегал к шейке матки.
-
Помощник через во р!
количество промывнойронку заливаетжидкости. вЗатем катетеркатетер небольшоеперекрывают, не допуская попадания в него воздуха. Помощник снимает воронку и опускает наружный конец инструмента в колбу с промывной жидкостью. Дальнейшее вливание раствора в маткуи его обратное извлечение проводят путем поднятия и опускания колбы на 1-1,5 метра выше и ниже уровня половых органов кобылы. Перфузия матки происходит по принципу сообщающихся сосудов.
6.ны| у ополаскивающим раствором (см. раздел «Приготовление растворов»).
-
Спускают воздух из фиксирующего баллона и извлекают катетер из матки.
-
Колбы с использованными растворами переносят в спе-
-
циальное помещение или бактерицидную камеру для поискачив УФ-облучение!.и оценки эмбрионов (предварительно выклю-
-
- Кобылу-донора освобождают и выводят из фиксационного станка.
| | |
4.8 ПОИСК, ОЦЕНКАИЗАПРАВКА ЭМБРИОНОВ В ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ПЕРЕСАДКИ 8-8,5- суточные эмбрионы имеют достаточно крупные размеры (от 0,7 до 1,4 мм в диаметре) и хорошо видны в промывной жидкости невооруженным глазом. По внешнему виду они напоминают икринку рыбы или лягушки. Имеют шаровидную форму и полупрозрачны. Обычно 85% зародышей отыскиваются в промывной жидкости и редко (до 15%) - в ополаскивающем растворе. Найденные в ополаскивающем растворе эмбрионы также пригодны для пересадки, но время их пребыванияв этом растворе должно быть максимально сокращено. Поэтому рекомендуем’ осмотр колб с целью поиска зародышей начинать с ополаскивающего раствора, а затем - промывной жидкости. Как в ополаскивающем, так и в промывном растворе зародыши оседают на дно сосуда. В случае затруднения с поиском зародыша раствор в колбе посредством плавных круговых движенийсевшийраскручивают,зародыш причто этомприводитвсплываетк взмучиваниюи, описываяосадка.круги, перемещаетсяруживаемым. Найденныев толще жидкостэмбр и оныи становитсяотсасывают легко обна-из колб посредством длинных стеклянных пипеток и переносят в чашки Петри с раствором ФБС для их оценки под бинокуляром. Для поиска мелких эмбрионов в промывной жидкости можно использовать специальные фильтры (например, ahaр атНЫ‚ оранция?.НЫ ehinitube, п о внешнему виду, при осмотре под микроскопом, эмтенциально жизнеспособные, проблемные или сомнительбрионы могут быть отнесены к одной из трех категории: поные и погибшие. Жизнеспособные эмбрионы имеют правильную форму (шаровидную или слегка эллипсоидную), полупрозрачны, имеют четко выраженную клеточную структуру и хорошо различимый зародышевый узелок (эмбриобласт). Эмбриональная оболочка (капсула) плотно прилегает к клеточной массе и при осмотре не видна (Рис.7). 51
