Проблемные или сомнительные эмбрионы также полупрозрачны, шаровидной формы, имеют четкую клеточную структуру. Капсула у них бывает частично или полностью отслоена от клеток трофобласта и хорошо видна при осмотре зародыша под микроскопом (Рис. 8.). В наших опытах были случаи приживления и развития таких эмбрионов в нормальных жеребят-трансплантатов. Однако процент приживляемости зародышей этой категории понижен. Погибшие эмбрионы непрозрачны, матового цвета, внешняя оболочка (капсула) сильно отделена от клеточной массы, клетки сморщены и сжаты в бесформенный комок (Puc.9). Пересадку таких эмбрионов не производят. он стерильнойПосле оценкипипеткой переносятпредназначенный из для пересадки раствора ФБС вэмбри- чашку Петри с пересадочным раствором. В целях удобства работы берут чашку Петри малого диаметра, пересадочный раствор наливают тонким слоем (2-3 мм) и помещают на столик микроскопа с нижней подсветкой. С помощью шприца (1-2 мл), через переходник, среду с зародышем, диаметр которого не превышает 07,-0,8 мм, засасывают в полиэтипеновую 0,5 соломинку (пайету) в следующей последовательности: 1/3 - 1/4 длины пайеты - пересадочная среда, затемс эмбрионом, 5-7 мм - пузырекзатем воздуха,снова пузырекзатем воздуха,1/3 - 1/4 пайетыи оставшееся- среда жидкостьюпространство заполняют средой. При соприкосновении с нец пайеты.клеевая пробка затвердевает, закупоривая коПайету. отсоединяют от переходника и помещают в abl струмент для пересадки открытым концом наружу, а клеевой пробкой - к стилету, навинчивают головку инструмента и на ют полиэтиленовый санитарный чехол. Готовый к пересадке 2/3 его длины вставляют стилет. Поверх инструмента надеваинструмент сохраняют в горизонтальном положении при температуре не ниже 18°С. Особенно тщательно следят за тем, чтобы вставленный на 2/3 длины стилет случайно не был продвинут глубже, что может привести к потере зародыша. ae
Для эмбрионов диаметром > 0,8 мм предусмотрены пересадочные пипетки с внутренним пластиковым катетером (например, фирмы Minitube, Германии), в который эмбрион с помощью шприца всасывается вместе с пересадочной средой в объеме 2 мл (Puc.6). В этом случае нет необходимости заправлять эмбрион в 0,5 мл соломинку перед пересадкой. Внутренний катетер плотно фиксируется в пипетке. При этом шприц остается соединенным с катетером до конца пересадки. При работе с эмбрионами необходимо тщательно следить за температурой растворов и окружающей среды, резкие изменения которой как в одну, так и в другую сторону могут привести к повреждению и гибели трансплантата. Поэтому все манипуляции с зародышами следует проводить в помещении или камере с соблюдением требуемого температурного режима.
-
4.9 ПЕРЕСАДКА ЗАРОДЫША КОБЫЛЕ-РЕЦИПИЕНТУ
-
Пересадку зародыша кобыле-реципиенту выполняют в
-
следующей последовательности: 1. Предварительно, для повышения уровня приживляемо| cm эмбриона ара кобылы команду ся ввести реципиенту миорелаксант (препарат «Ханегиф», Венгрия,седативноевнутримышечносредство. 8-10 мл) и, ' при необходимости,
-
Через 15-20 минут после инъекции кобылу-реципиента заводятвых массв еестанок, прямуюфиксируют, кишку, тщательноосвобождают с мыломOT моюткалонаружные половые органы и прилегающую к ним область, ополаскивают и высушивают бумажным положении. тенцем, бинтуют и фиксируют хвост в верхнем поло-
-
Одетой в одноразовую стерильную полиэтиленовую перчатку рукой берут приготовленный для пересадки инструмент с эмбрионом и сверху на его головную часть и руку надевают защитный полиэтиленовый че-
53
хол, как описано выше. Наружный чехол смазывают стерильным любрикантом (гелем-смазкой) для искусственного осеменения или УЗИ. Для металлического катетера с соломинкой внимательно проверяют положение отверстия для выхода эмбриона относительно прорези на наружной шайбе катетера, чтобы правильно сориентировать инструмент в матке кобылы (отвер4. Вводятстием вниз).руку с инструментом во влагалище кобылы.
-
Разъединяют верхний защитный чехол. Осторожно продвигают головную часть инструмента в цервикальный канал. Не касаясь стилета, прокалывают инструментом второй защитный санитарный чехол. Для пипетки с внутренним катетером следует воспользоваться помощью ассистента, который должен придерживать присоединенный к катетеру шприц, чтобы он не сорвался и жидкость с эмбрионом не вылилась раньше времени.
-
Вводят инструмент в тело матки кобылы-реципиента на глубину 2-5 см. Ориентируют инструмент по прорези шайбы так, чтобы его выходное отверстие в матке было направлено вниз, выталкивают содержимое пайеты, задвинув стилет в инструмент до конца. При использовании пипетки с внутренним катетером, присоединенным шприцем выдавливают его содержимое (2 мл среды с эмбрионом) в матку кобылы.
-
Извлекают руку с инструментом из влагалища. Освобождают и выводят кобылу из станка. После переседки кобылу-реципиента желательно поводить 5-7 минут, прежде чем поставить в денник. В дальнейшем кобыле-реципиенту рекомендован курс прогестиновой терапии (ежедневные внутримышечные инъекции по 4 мл 2,5% прогестерона в масле, либо прогестерона в оральной форме (Регумэйт, Альтреногест) с целью поддержания функции желтого тела для наступления и сохранения беременности. Обработку реципиента проводят, как минимум, до плацентации (45 дней жеребости).
