2.4.2 ТЕХНОЛОГИЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ! ЖЕРЕБЦОВ ОБЪЕМОМ 5-6 МЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ Полученный эякулят помещают в бактерицидную камеру при температуре 25-30°С и выдерживают в течение 1 часа перед разбавлением и охлаждением. После часовой инкубации цельной свежеполученной спермы при температуре 25-30°С, ее сгущают посредством центрифугирования в течение 10-15 минут при 1500 об/мин. Температура в камере центрифуги должна составлять 20-25°С. После центрифугирования удаляют 50-60% плазмы так, чтобы в оставшейся небольшой части осадка было 500-600 млн спермиевв 1 мл. В связи с этим необходимо следить за тем, чтобы изначальная концентрация спермиев была не менее 200 млн/мл. Затем, осадок спермиев разбавляют ЛХЦЖсредой без глицерина в соотношении 1:3.
Разбавленную сперму разливают в большие пакеты, плотно закрывают с тем, чтобы обеспечить анаэробные условия. Затем пакеты со спермой помещают в камеру с температурой 14-16°С на1 час. Через 1 час пакеты со спермой переносят в холодильную камеру с температурой 2-4° С. Время выдержки при данной температуре - 1 час. Средняя скорость снижения температуры - 0,2°С в минуту. После этого большие пакеты достают из холодильника, распаковывают, сливают в охлажденную мензурку и вводят глицерин из такого расчета, чтобы конечная его концентрация составляла 2,3 объемных процента. Сперму вторично расфасовывают в алюминиевые пакеты по 5-6 мл. Каждый пакет должен быть маркирован с указанием клички жеребца, породы, даты замораживания. Пакеты со спермой укладывают в ледяную баню при температуре 0°С и выдерживаютв ней 25-30 минут. Затем пакеты, заполненные подготовленной к замораживанию спермой, достают из ледяной бани, обтирают насухо стерильным полотенцем и
помещают на держатели. Последние вместе с поплавками переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в жидкий азот и контейнер закрывают крышкой (расстояние от пакетов до жидкого азота должно составлять 1020 мм) и через 5 минут пакеты опускают в жидкий азот на хранение.
2.4.3. ТЕХНОЛОГИЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ОБЪЕМОМ 5 МЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ДИАЛИЗА Свежеполученную сперму фильтруют, измеряют объем и переносят в диализатор. Диализатор представляет собой емкость, состоящую из 2-х камер, разделенных полупроницаемой мембраной. В качестве мембраны используют гидратцеллюлозную пленку ОБ-20 или импортную пленку типа "купрофан". Мембранную пленку закрепляют резиновым кольцом на цилиндре так, чтобы она свисала мешочком, образуя внутреннюю камеру, куда помещается свежевзятая сперма. Камеру со спермой помещают в сосуд, содержащий диализный раствор. В качестве раствора используют ЛХЦЖ-среду, в соотношении 1:4. Желток вводят непосредственно в сперму в количестве 3 мл или 2гна 100 мл. При этом желток предварительно растворяют в равном объеме 11 % раствора лактозы и затем приливают к сперме. Диализная обработка длится 4 часа, из них 2 часа при комнатной температуре (18-20°С) и 2 часа при температуре 2-4°С в бытовом холодильнике. В течение этого времени диализатор необходимо периодически встряхивать, чтобы диффузия веществ шла быстрее. Затем сперму из диализатора переливают в подготовленные алюминиевые пакеты по 5 мл, замораживают по представленной выше схеме.
24.4 ХРАНЕНИЕ ЗАМОРОЖЕННОЙ СПЕРМЫ
Для постоянного длительного хранения в жидком азоте консервированной спермы используют стационарные хранилища для биопродуктов емкостью 500-600 л. Для непродолжительного хранения замороженную сперму жеребцов желательно хранить в сосудах Дьюара с диаметром горловины 88 мм: СДСТ-35, СДСТ-35М, СДП-35/90 (НПО Гелиймаш) или в сосудах СДС-50, СДС-20, СД-50М, СД-20М (Харьков) и др. Для транспортировки выпускаются маленькие сосуды Дьюара СДС-6, СДС-6М, СДС-16. При перевозках сосуды должны быть зафиксированы, во избежание их опрокидывания. Необходимо следить, чтобы уровень жидкого азота не опускался ниже заложенных на хранение доз спермы. We кая технология позволяет хранить сперму много лет. Но при этом не допускается преждевременное оттаивание и повторное замораживание спермы. Даже кратковременное повышениекачестве спермы,температурыпоэтомудодо-125°Сиспользованиявредно отражаетсянеобходимона хранить сперму в жидком азоте постоянно. Нарушение этого правила приводит к снижению качества спермы и потере ее оплодотворяющей способности.
2.4.5 ОТТАИВАНИЕ КРИОКОНСЕРВИРОВАННОЙ СПЕРМЫ
На основании ГОСТа 24168-80 (Сперма жеребцов замороженная) сперма после оттаивания, сохраненная не более 15 минут, должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 6.
В стерильную стеклянную колбу или мензурку наливают 100 мл дистиллированной воды, добавляют глюкозу или лактозу. Содержимое подогревают до закипания и взбал-
