Изделия из пластмассы, не выдерживающие тепловой стерилизации, моют, обеззараживают 70% этиловым спиртом, просушивают, выдерживают под УФ-облучением не менее 2 часов, упаковывают в стерильную бумагу и хранят в бактерицидной камере. Перед использованием инструментов в камере снова включают облучение на 2-3 часа. Полиэтиленовые перчатки и чехлы! одноразового пользования обрабатывают бактерицидными лампами в биокамерев течение2 часов. За сутки до намечаемой пересадки проводят влажную уборку и дезинфекцию помещений 3% раствором перекиси водорода (или «Глютекса»). Для приготовления дезинфицирующего раствора к 9 литрам воды добавляют 1 л 25-20% раствора перекиси и 50 г моющего средства. Для дезинфекции воздуха в помещении используют бактерицидные лампы, которые включают на 2-3 часа и выключают за 1 час до начала работ по трансплантации. При недостаточной мощности ультрафиолетового облучения (2 вт/мг) его продолжительность пропорционально увеличивают. В помещениях, где проводится работа с эмбрионами, должна поддерживаться температура 25-28°С и влажность воздуха 70-80%. Приборы и лабораторные столы протирают ватными тампонами, смоченнымив70° спирте. Флаконы с фосфатнобуферной средой Дюльбекко также обрабатывают спиртовыми тампонами, пробку и горлышко обжигают пламенем горелки. Спецодежду операторов стерилизуют в сушильном шкафу или автоклаве в стандартном режиме.
Для извлечения,4.6 ПРИГОТОВЛЕНИЕ непродолжительногоРАСТВОРОВхранения т vitro (вне организма) и пересадки эмбрионов лошадей применяют три раствора различного состава: = 1. Промывной раствор применяют для извлечения и не рионов продолжитеньногы хранения (до 1 часе) эмб
in vitro. На промывание матки одной кобылы-донора обычно расходуют 2-2,5 литра этого раствора. Расход раствора зависит от величины животного, из расчета 0,5 литра на 100 кг живой массы донора. Учитывается также половой статус животного (у выжеребившихся или много рожавших кобыл размер матки может быть больше, чем у молодых кобыл). Для целей вымывания применяется фосфатно-солевой буферный раствор Дюльбекко (ФБС), выпускаемый отечественными (НПП «Панэко») и зарубежными («Minitube», Германия) фирмами. Правила хранения и срок годности pac твора указаны на этикетке флаконов. Содержимое из стерильно откупоренных флаконов переливают в стеклянную колбу емкостью 2000 мл. 2. Ополаскивающий раствор используют для промывания матки кобылы-донора после извлечения эмбриона с целью подавления развития случайно занесенной в ее | полость микрофлоры. Готовят 2 литра 0,9% раствора | поваренной соли (NaCl) на основе дистиллированной | воды. Двукратно доводят его до закипания (не давая кипеть), охлаждают до температуры 36-37°С и затем | добавляют 20 мл 3%-ного раствора препарата «Полиген» (фирма «Мосагроген») из расчета 300 мкг/мл. 3. Пересадочный раствор представляет собой среду, обогащенную энергетическими источниками, поддерживающими эмбрион в жизнеспособном состоянии. Для этого используют ФБС Дюльбекко с добавлением 3-5% инактивированной фетальной сыворотки теленка или 5% бычьего сывороточного альбумина и антибиотиков (полиген в концентрации 300 мкг/мл). В этом раствореи переносят зародышив помещаютматку кобыл-рв п е ципиентов.ресалочный Готовятинструментраствор в заранее простерилизованном и закупоренном AOC ФвиНЬ, неее шприцем отбирают из флакона с ФБС Дюльбекко 10 мл раствора и закачивают в пенициллиновый флакон.
Туда же через стерильный шприц добавляют 0,3-0,5 | мл инактивированной (предварительно выдержанной тальной сыворотки теленка. Затем добавляют 0,1 мл в течение 30 минут при 56-58°С на водяной бане) феполигена(величину рассчитатьв соответствиис исхо- дной дозировкой препарата). Ингредиенты осторожно перемешивают, не допуская образования пены. В такой среде эмбрион может находиться при температуFen Ok между вымыванием и пересадкой 37°С в npevionax0 мину Дляболее длительного хранения эмбриона рекоменду- вм применять культуральную среду, разработанную в лабораториифизиологии размножения лошадей ВНИИ коневод- ства (Лебедев С.Г., Лебедева Л.Ф. Авторское свидетельство №1497215 от 1.04.1989 г.). Она готовится следующим образом. Стерильным шприцем на 5 мл через иглу набирают 4 мл ФБС Дюльбекко и вводят, прокалывая пробку, в пенициллиновый флакон. Затем этим же шприцем засасываtoT 4 мл желтка куриного яйца категории «диетическое» и ВВОДЯТ в тот же флакон (для желтка удобнее пользоваться шприцем без иглы или толстой иглой). Полиген можно добавить отдельно (300 мкг/мл) или в составе ФБС Дюльбекко. Содержимое флакона (8 мл) тщательно перемешивают горизонтальными крутящими движениями, не допуская вспенивания. После перемешивания раствор готов к употреблению. В такой культуральной среде эмбрион при 37°С не только сохраняет жизнеспособность в течение, как минимум, 24 часов, но продолжает расти и развиваться. Однако, данный вариант пересадочного раствора подходит для эмбрионов диаметром >0,8 мм, поскольку он непрозрачный из-за высокого содержания желтка. Но эмбрионы глазом. в нем всплывают к поверхности и хорошо видны невооруженным С целью поддержания оптимальной температуры все три пературой 37°C. приготовленных раствора помещают в термостат с тем48
