Оценку подвижности спермы проводят с помощью микроскопии при температуре 38-40°C, используя специальный обогревательный столик (столик Морозова). Для этого на подогретое предметное стекло наносят стерильной палочкой или пипеткой каплю спермы, накрывают ее чистым покровным стеклом и просматривают под микроскопом при увеличении в 200-300 раз и неярком освещении. При нагревании сперматозоиды начинают двигаться не сразу, поэтому для объективной оценки качества спермы ее надо наблюдать иногда до 1-2 мин, пока сперматозоиды проявят наибольшую подвижность. При этом следует брать большую каплю спермы, так как при 3840°С малые капли быстро высыхают, отчего сперматозоиды погибают.
Подвижность сперматозоидов оценивают по десятибалльной шкале. В поле зрения микроскопа глазомерно определяют количество сперматозоидов с активным прямолинейнопоступательным движением в процентах к общему числу перматозоидов. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой все 100 % сперматозоидов имеют прямолинейнопоступательное движение, 9 баллов - примерно 90 %, 7 баллов - 70 % сперматозоидов и т.д. Полное отсутствие сперматозоидов в поле зрения обозначается буквой А (азоспермия). Если в поле зрения все сперматозоиды находятся без движения, то такое состояние обозначается буквой Н (некроспермия).
Важным условием в оценке качества спермы является ее переживаемость вне организма. Этот показатель определяют следующим образом: после оценки подвижности спермы под микроскопом в две стерильные пробирки (пенициллиновые флаконы) емкостью 20 мл наливают по 1 мл свежевзятой спермы, в каждую из которых добавляют по 3 мл ЛХЦЖ-среды. Coстав этой среды приведен ниже. Параллельное исследование (в двух пробирках) ведут для получения результатов большей точности. Пробирки закрывают пробками и переносят для хранения в холодильник или термос со льдом (температура 2-4°С).
Через каждые 12 часов производят контроль активности движения сперматозоидов под микроскопом до полного прекращения их поступательного движения. В специальный журнал записывают дату, часы просмотра и оценки активности сперматозоидов в баллах. На основании записей подсчитывают переживаемость сперматозоидов в часах. При ее вычислении берется время от начала наблюдения до момента установления колебательного движения или гибели всех сперматозоидов, и из полученной суммы вычитают половину времени между предпоследним и последним наблюдениями. Это делается потому, что активное прямолинейно-пеступательное движение прекратилось в промежутке между просмотрами. Показатели переживаемости сперматозоидов значительно варьируют по отдельным жеребцам и в среднем составляют 140-190 часов.
2.8 ЯАДВАВЛЕНИЕ ИХРАНЕНИЕ GEREN 2.3.1 РАЗБАВЛЕНИЕ Хранение спермы становится возможным после его разбавления и охлаждения.
Для разбавления спермы жеребца предложено несколько разбавителей, которые готовят непосредственно перед получением спермы. Предназначенные для разбавителя спермы компоненты должны иметь категорию очистки не ниже ХЧ (химически чистые) и их следует сохранять в полном соответствии с условиями, обозначенными на этикетке.
Каждая новая партия применяемых для приготовления разбавителей химических препаратов должна быть проверена. на безвредность для спермиев жеребца. Компоненты (вещества), входящие в состав искусственных сред, отвешивают на аналитических или аптекарских весах. Перед отвешиванием реактивов проверяют точность весов, затем спиртовым (96°) тампоном протирают правую чашку весов.
В стерильную стеклянную колбу или мензурку наливают 100 мл дистиллированной воды, добавляют глюкозу или лактозу. Содержимое подогревают до закипания и взбалтывают до полного растворения осадка. После охлаждения раствора до 30-35°С отвешивают и добавляют в среду остальные комee
Яйца перед использованием моют, протирают тампоном, или на листок фильтровальной бумаги. Затем, согласно рецепту, стерильной пипеткой набирают, либо отвешивают необходимое количество желткаи вносят его в среду. |+перму жеребца разбавляют путем постепенного приливания к ней среды, постоянно помешивая стерильной стеклянной палочкой. Разбавление путем добавления спермы в среду недопустимо.
Среда должна иметь температуру 25-30°С. Для разбав~ ления допускают сперму с оценкой по подвижности не ниже 5 баллов и с концентрацией не менее 150 млн спермиев в 1 мл. Разбавляют сперму в 3-4 раза, то есть к одному объему спермы приливают 2-3 объема среды. Разбавленную сперму обязательно проверяют под микроскопом. Приготовленная среда для разбавления спермы должна быть использована в течение 3-4 часов, более длительное ее хранение не допускается. Сперма, разбавленная молочной или молочно-желточной средой, должна использоваться для осеменения как можно быстрее, в течение не более 6 часов.
