При замораживании спермы в алюминиевых тубах её разливаютменее 15 мл.по дозамЗаполненнуюв охлаждённыеспермой тубупакетызакрываютобъемом и за-не жимают специальным зажимом. При упаковке необходимо строго следить за тем, чтобы в тубе не остался воздух, иначе при оттаивании неизбежны разрывы. Расфасованные дозы спермы должны быть маркированы: иметь кличку жеребца, породу, дату замораживания спермы. Пакеты, заполненные спермой, помещают в держатели, которые вместе с поплавком переносят на поверхность жидкого азота в контейнер-замораживатель, который закрывают крышкой (расстояние от пакетов до жидкого азота 20 мм). Через 5 минут тубы с замороженной спермой переносят в жидкий азот на хранение.
При замораживании в форме гранул сперму наносят каплями по 0,2 мл в лунки на поверхности сухого льда. Через 5 минут после замораживания гранулы собирают и упаковывают в алюминиевые пакеты (125-130 гранул = 25 млв дозе) и помещают на хранение в жидкий азот.
Через 24 часа после замораживания оттаивают один пакет (объём спермы в контрольном пакете может быть уменьшен до 5 мл) из каждого эякулята и проверяют HOA вижность спермиев. Для дальнейшего хранения допускают сперму с подвижностью не ниже 2 баллов. Рекомендуется замороженную сперму каждого жеребца хранить в отдельных канистрах сосуда Дьюара.
Использование замороженной спермы жеребцов для искусственного осеменения кобыл разрешается не ранее чем через 28 дней после замораживания (в соответствии с правилами карантинирования) и при наличии документа, характеризующего качество спермы по микробиологиче ским и биологическим показателям.
2.4.2 ТЕХНОЛОГИЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ! ЖЕРЕБЦОВ ОБЪЕМОМ 5-6 МЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ Полученный эякулят помещают в бактерицидную камеру при температуре 25-30°С и выдерживают в течение 1 часа перед разбавлением и охлаждением. После часовой инкубации цельной свежеполученной спермы при температуре 25-30°С, ее сгущают посредством центрифугирования в течение 10-15 минут при 1500 об/мин. Температура в камере центрифуги должна составлять 20-25°С. После центрифугирования удаляют 50-60% плазмы так, чтобы в оставшейся небольшой части осадка было 500-600 млн спермиевв 1 мл. В связи с этим необходимо следить за тем, чтобы изначальная концентрация спермиев была не менее 200 млн/мл. Затем, осадок спермиев разбавляют ЛХЦЖсредой без глицерина в соотношении 1:3.
Разбавленную сперму разливают в большие пакеты, плотно закрывают с тем, чтобы обеспечить анаэробные условия. Затем пакеты со спермой помещают в камеру с температурой 14-16°С на1 час. Через 1 час пакеты со спермой переносят в холодильную камеру с температурой 2-4° С. Время выдержки при данной температуре - 1 час. Средняя скорость снижения температуры - 0,2°С в минуту. После этого большие пакеты достают из холодильника, распаковывают, сливают в охлажденную мензурку и вводят глицерин из такого расчета, чтобы конечная его концентрация составляла 2,3 объемных процента. Сперму вторично расфасовывают в алюминиевые пакеты по 5-6 мл. Каждый пакет должен быть маркирован с указанием клички жеребца, породы, даты замораживания. Пакеты со спермой укладывают в ледяную баню при температуре 0°С и выдерживаютв ней 25-30 минут. Затем пакеты, заполненные подготовленной к замораживанию спермой, достают из ледяной бани, обтирают насухо стерильным полотенцем и
помещают на держатели. Последние вместе с поплавками переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в жидкий азот и контейнер закрывают крышкой (расстояние от пакетов до жидкого азота должно составлять 1020 мм) и через 5 минут пакеты опускают в жидкий азот на хранение.
2.4.3. ТЕХНОЛОГИЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ОБЪЕМОМ 5 МЛ С ПРИМЕНЕНИЕМ ДИАЛИЗА Свежеполученную сперму фильтруют, измеряют объем и переносят в диализатор. Диализатор представляет собой емкость, состоящую из 2-х камер, разделенных полупроницаемой мембраной. В качестве мембраны используют гидратцеллюлозную пленку ОБ-20 или импортную пленку типа "купрофан". Мембранную пленку закрепляют резиновым кольцом на цилиндре так, чтобы она свисала мешочком, образуя внутреннюю камеру, куда помещается свежевзятая сперма. Камеру со спермой помещают в сосуд, содержащий диализный раствор. В качестве раствора используют ЛХЦЖ-среду, в соотношении 1:4. Желток вводят непосредственно в сперму в количестве 3 мл или 2гна 100 мл. При этом желток предварительно растворяют в равном объеме 11 % раствора лактозы и затем приливают к сперме. Диализная обработка длится 4 часа, из них 2 часа при комнатной температуре (18-20°С) и 2 часа при температуре 2-4°С в бытовом холодильнике. В течение этого времени диализатор необходимо периодически встряхивать, чтобы диффузия веществ шла быстрее. Затем сперму из диализатора переливают в подготовленные алюминиевые пакеты по 5 мл, замораживают по представленной выше схеме.
