целью индукции овуляции в необходимые сроки. Основанием для выбора той или иной схемы обработки кобылреципиентов служит фактически установленная разница сроков овуляции у намечаемых кобыл - потенциальных доноров и реципиентов - в предшествующем пересадке эмбриона эстральном цикле. Схема 1. Если овуляция у кобылы-донора за цикл до пересадки наступила одновременно или чуть раньше (до трех суток), чем у потенциального реципиента, то в момент установления овуляции у донора кобыле-реципиенту следует ввести внутривенно 2000 МЕ человеческого хорионического гонадотропина. Овуляция у реципиента должна наступить через 36-48 часов после инъекции. Асинхронность донора и реципиента при этом составит -48 часов. Схема 2. Если овуляция у кобылы-донора за цикл до пересадки наступила Ha 3-10 суток раньше, чем у рецЦипиента, то в первый день проявления охоты кобылойдонором кобыле-реципиенту следует ввести внутримышечно простагландин F2a (название препаратов - Эстрофан, Энзапрост-Ф, Эструмат, Клопростенол, Динопрост, Просольвин, Клатрапростин и т.д.) в рекомендованных для кобыл дозировках (! Обращаем особое внимание на дозировки этих препаратов применительно к лошадям. Обычно дозы простагландинов для лошадейв 2-4 раза ниже, чем для крупного рогатого скота). Затем, в день наступления овуляции у кобылы-донора, кобыле-реципиенту вводят внутривенно 2000 МЕ человеческого хорионического гонадотропина. Схема 3. Если за цикл до пересадки овуляция кобылыреципиента наступила раньше, чем у кобылы-донора на 2-6 дней, то через 6 дней после овуляции у кобылы-донора обеим кобылам (и донору, и реципиенту) вводят внутримышечно простагландин F2a и через 5 суток - внутривенно 2000 МЕ человеческого хорионического гонадотропина.
- В целях страховки от случайных факторов рекомендуем готовить на одного потенциального донора 2-3 потенциальных рециниента.
В случае, если донор осеменен правильно и своевременно и степень синхронности половых функций донора и реципиента находится в пределах от + 24 до -72 часов, задача по подготовке кобыл к пересадкам считается выполненной, и можно рассчитывать на положительный результат. Извлечение и пересадку зародышей производят через 8-8,5 суток после овуляции у кобыль-донора. |
|
4.5 ПОДГОТОВКА ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ, ОБОРУДОВАНИЯ И ПОМЕЩЕНИЙ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ Работа по извлечению и пересадке эмбрионов требует строгого соблюдения мер асептики и санитарноветеринарных правил. Рекомендуется использование одноразовых инструментов и посуды.
Используемую лабораторную посуду, катетеры многоразового применения моют в растворе нейтрального моющего средства, затем ополаскивают проточной, дистиллированной и бидистиллированной водой. Стеклянную посуду (колбы, воронки, пипетки, чашки) высушивают, заворачивают в пергаментную бумагу и стерилизуют сухим жаромBTe- чение 2-х часов при температуре 150°С или 3-х часов - при температуре 140°С. В таком же режиме обеззараживают помещенный в стеклянную пробирку металлический катетер для пересадки эмбрионов, пипетки для переноса эмбрионов. Резиновый катетер для извлечения эмбрионов, шприцы и иглы кипятят в отдельных стерилизаторах в течение 40 минут, воду сливают, не открывая крышки, и охлаждают до комнатной температуры.
При наличии автоклава, все термически устойчивое оборудование, спецодежду и т.п. можно стерилизовать горячим паром в режиме 1,5 атм. в течение 30 минут.
Изделия из пластмассы, не выдерживающие тепловой стерилизации, моют, обеззараживают 70% этиловым спиртом, просушивают, выдерживают под УФ-облучением не менее 2 часов, упаковывают в стерильную бумагу и хранят в бактерицидной камере. Перед использованием инструментов в камере снова включают облучение на 2-3 часа. Полиэтиленовые перчатки и чехлы! одноразового пользования обрабатывают бактерицидными лампами в биокамерев течение2 часов. За сутки до намечаемой пересадки проводят влажную уборку и дезинфекцию помещений 3% раствором перекиси водорода (или «Глютекса»). Для приготовления дезинфицирующего раствора к 9 литрам воды добавляют 1 л 25-20% раствора перекиси и 50 г моющего средства. Для дезинфекции воздуха в помещении используют бактерицидные лампы, которые включают на 2-3 часа и выключают за 1 час до начала работ по трансплантации. При недостаточной мощности ультрафиолетового облучения (2 вт/мг) его продолжительность пропорционально увеличивают. В помещениях, где проводится работа с эмбрионами, должна поддерживаться температура 25-28°С и влажность воздуха 70-80%. Приборы и лабораторные столы протирают ватными тампонами, смоченнымив70° спирте. Флаконы с фосфатнобуферной средой Дюльбекко также обрабатывают спиртовыми тампонами, пробку и горлышко обжигают пламенем горелки. Спецодежду операторов стерилизуют в сушильном шкафу или автоклаве в стандартном режиме.
Для извлечения,4.6 ПРИГОТОВЛЕНИЕ непродолжительногоРАСТВОРОВхранения т vitro (вне организма) и пересадки эмбрионов лошадей применяют три раствора различного состава: = 1. Промывной раствор применяют для извлечения и не рионов продолжитеньногы хранения (до 1 часе) эмб
