-
С целью фиксации инструмента в матке, помощник шприцем через специальный воздушный канал накачивает в раздуваемый баллон катетера 60 мл воздуха, запирая цервикальное отверстие изнутри, и перекрывает воздушный канал катетера зажимом. После этого катетер следует чуть потянуть наружу, чтобы баллон плотно прилегал к шейке матки.
-
Помощник через во р!
количество промывнойронку заливаетжидкости. вЗатем катетеркатетер небольшоеперекрывают, не допуская попадания в него воздуха. Помощник снимает воронку и опускает наружный конец инструмента в колбу с промывной жидкостью. Дальнейшее вливание раствора в маткуи его обратное извлечение проводят путем поднятия и опускания колбы на 1-1,5 метра выше и ниже уровня половых органов кобылы. Перфузия матки происходит по принципу сообщающихся сосудов.
6.ны| у ополаскивающим раствором (см. раздел «Приготовление растворов»).
-
Спускают воздух из фиксирующего баллона и извлекают катетер из матки.
-
Колбы с использованными растворами переносят в спе-
-
циальное помещение или бактерицидную камеру для поискачив УФ-облучение!.и оценки эмбрионов (предварительно выклю-
-
- Кобылу-донора освобождают и выводят из фиксационного станка.
| | |
4.8 ПОИСК, ОЦЕНКАИЗАПРАВКА ЭМБРИОНОВ В ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ПЕРЕСАДКИ 8-8,5- суточные эмбрионы имеют достаточно крупные размеры (от 0,7 до 1,4 мм в диаметре) и хорошо видны в промывной жидкости невооруженным глазом. По внешнему виду они напоминают икринку рыбы или лягушки. Имеют шаровидную форму и полупрозрачны. Обычно 85% зародышей отыскиваются в промывной жидкости и редко (до 15%) - в ополаскивающем растворе. Найденные в ополаскивающем растворе эмбрионы также пригодны для пересадки, но время их пребыванияв этом растворе должно быть максимально сокращено. Поэтому рекомендуем’ осмотр колб с целью поиска зародышей начинать с ополаскивающего раствора, а затем - промывной жидкости. Как в ополаскивающем, так и в промывном растворе зародыши оседают на дно сосуда. В случае затруднения с поиском зародыша раствор в колбе посредством плавных круговых движенийсевшийраскручивают,зародыш причто этомприводитвсплываетк взмучиваниюи, описываяосадка.круги, перемещаетсяруживаемым. Найденныев толще жидкостэмбр и оныи становитсяотсасывают легко обна-из колб посредством длинных стеклянных пипеток и переносят в чашки Петри с раствором ФБС для их оценки под бинокуляром. Для поиска мелких эмбрионов в промывной жидкости можно использовать специальные фильтры (например, ahaр атНЫ‚ оранция?.НЫ ehinitube, п о внешнему виду, при осмотре под микроскопом, эмтенциально жизнеспособные, проблемные или сомнительбрионы могут быть отнесены к одной из трех категории: поные и погибшие. Жизнеспособные эмбрионы имеют правильную форму (шаровидную или слегка эллипсоидную), полупрозрачны, имеют четко выраженную клеточную структуру и хорошо различимый зародышевый узелок (эмбриобласт). Эмбриональная оболочка (капсула) плотно прилегает к клеточной массе и при осмотре не видна (Рис.7). 51
Проблемные или сомнительные эмбрионы также полупрозрачны, шаровидной формы, имеют четкую клеточную структуру. Капсула у них бывает частично или полностью отслоена от клеток трофобласта и хорошо видна при осмотре зародыша под микроскопом (Рис. 8.). В наших опытах были случаи приживления и развития таких эмбрионов в нормальных жеребят-трансплантатов. Однако процент приживляемости зародышей этой категории понижен. Погибшие эмбрионы непрозрачны, матового цвета, внешняя оболочка (капсула) сильно отделена от клеточной массы, клетки сморщены и сжаты в бесформенный комок (Puc.9). Пересадку таких эмбрионов не производят. он стерильнойПосле оценкипипеткой переносятпредназначенный из для пересадки раствора ФБС вэмбри- чашку Петри с пересадочным раствором. В целях удобства работы берут чашку Петри малого диаметра, пересадочный раствор наливают тонким слоем (2-3 мм) и помещают на столик микроскопа с нижней подсветкой. С помощью шприца (1-2 мл), через переходник, среду с зародышем, диаметр которого не превышает 07,-0,8 мм, засасывают в полиэтипеновую 0,5 соломинку (пайету) в следующей последовательности: 1/3 - 1/4 длины пайеты - пересадочная среда, затемс эмбрионом, 5-7 мм - пузырекзатем воздуха,снова пузырекзатем воздуха,1/3 - 1/4 пайетыи оставшееся- среда жидкостьюпространство заполняют средой. При соприкосновении с нец пайеты.клеевая пробка затвердевает, закупоривая коПайету. отсоединяют от переходника и помещают в abl струмент для пересадки открытым концом наружу, а клеевой пробкой - к стилету, навинчивают головку инструмента и на ют полиэтиленовый санитарный чехол. Готовый к пересадке 2/3 его длины вставляют стилет. Поверх инструмента надеваинструмент сохраняют в горизонтальном положении при температуре не ниже 18°С. Особенно тщательно следят за тем, чтобы вставленный на 2/3 длины стилет случайно не был продвинут глубже, что может привести к потере зародыша. ae
