В моче исследуют содержание билирубина и уробилиноидов. У новорожденных телят билирубин в моче отсутствует до первого кормления, после которого (через 2-3 часа) его регистрируют, затем концентрация билирубина резко увеличивается (в 9,4 раза) и в суточном возрасте достигает уровня, который сохраняется в течение двух суток. В конце первой декады жизни в сравнении с показателем суточных телят содержание билирубина снижается, а референтный интервал находится в пределах 0-2,0 мкмоль/л, соответствующий параметрам взрослых животных.
В кишечнике происходят активные процессы метаболизма желчных пигментов. Под действием клеточных дегидрогеназ и ферментов бактерий из билирубина образуются уробилиноиды, в частности, стеркобилиноген и стеркобилин. У 55-62% телят стеркобилин в кале появляется на вторые сутки жизни, а на третьи он обнаруживается у всех обследуемых животных. В течение первых двух недель жизни наблюдается рост количества пигмента (среднесуточный прирост 1,5 мкмоль/сут) и формируется его уровень, сохраняющийся в течение первого месяца жизни.
Чужеродные соединения и метаболиты, образующиеся в процессе обмена веществ, выводятся из организма в неизменённом виде или после соответствующего биохимического превращения (биотрансформация). В результате биотрансформации снижается токсичность соединения, появляется или повышается его транспортабельность. При изучении поглотительно-выделительной функции акцентируется внимание на механизмах фиксации вещества из кровотока и выведении его с желчью. С этой целью в клинической практике наиболее часто используют индикаторные краски: бромсульфалеин и индоциан зелёный.
Бромсульфалеиновая проба (проба Розенталя и Уайта, нагрузочная проба тетрабромфенолфталеином) . Введённый внутривенно бромсульфалеин (БСФ, динатриевая соль фенолтетрабромфталеиновой кислоты), поглощается печенью и выводится с желчью в виде соединений с цистеином и глутатионом. Небольшое количество красителя выделяется через почки. Механизмы образования комплексов БСФ с белками крови, элиминации их из кровотока и введение в состав желчи аналогичен процессам биотрансформации билирубина и других низкомолекулярных веществ. Время элиминации зависит от функционального состояния печени. При оценке результатов пробы рассчитывают интегральный коэффициент элиминации по формулам:
R45=(Е0-Е45):Е0 х 100;
С45=100 - R45
где R45 – объём элиминации красителя (%) в течение 45 минут; Е0 и Е45 – экстинкция до и через 45 минут после введения красителя; С45 – объём красителя (%), который остается в кровотоке через 45 минут после его введения.
Наиболее низкая активность выведения красителя из кровотока наблюдается в первый час жизни. В течение последующих 24 часов процессы элиминации активизируются и, как следствие, остаточный объём красителя через 45 минут снижается на 18,0-18,5%. Объём красителя, циркулирующий в кровотоке через 45 минут после его введения, снижается в период с 15 по 30 сутки на 40-45% (табл. 1).
Таким образом, телята рождаются со сформированными механизмами биотрансформации бромсульфалеина, активация которых происходит в течение первых 24 часов после рождения, а становление функции наблюдается в течение 30-ти суток жизни, когда её параметры достигают уровня взрослых животных. Референтными показателями бромсульфалеиновой пробы является циркуляция красителя в кровотоке через 45 минут после его введения у телят в возрасте до 15 суток в количестве 2,5-7,0%, у молодняка старше 20 суток и взрослых животных ≤5,0% красителя от введенного объёма.
Вофавердиновая проба (индоциановая, уевердиновая). Ее оценивают по скорости элиминации красителя индоциан зелёный. В отличие от бромсульфалеина последний значительно быстрее выводится из крови, не поглощаясь внепечёночными клеточными мембранами. Помимо этого на результаты пробы не влияет наличие гемолиза в сыворотке крови, а введение красителя не вызывает осложнений. Результаты пробы оценивают по содержанию красителя в крови через 20 минут после его введения (С20).У телят минимальный уровень элиминации вофавердина регистрируют в первые часы после рождения, затем он увеличивается на 8,8% к суточному возрасту и на 31,0% в конце первой декады жизни, достигая уровня взрослых животных.
Таким образом, телята рождаются с сформированными механизмами биотрансформации индоциан зелёного, активация которых происходит в первые 24 часа после рождения, а становление функции наблюдается в течении первой декады жизни, когда её параметры достигают уровня взрослых животных. Референтными показателями вофаверидиновой пробы является циркуляция в кровотоке красителя через 20 минут после его введения у телят в течение первых трёх дней жизни ≤ 6,5%, в возрасте от 3 до 10 суток ≤ 6,0%, у молодняка старше 10 суток и взрослых животных ≤5,0% от введенного объёма.
При изучении биотрансформирующей функции акцентируется внимание на механизмах фиксации вещества из кровотока и его метаболических превращениях. Вещества, подвергнутые процессам биотрансформации, изменяют свои структурно-функциональные свойства или образуется несколько метаболитов. При этом образующиеся соединения могут не только потерять, но и усилить или приобрести токсические свойства, поэтому данную функцию печени часто называют обезвреживающей или антитоксической, акцентируя внимание на ведущей роли этого органа в за-
щите организма от токсических веществ. В клинической практике активность биотрансформации интерпретируют как показатель функциональной активности органа и оценивают по результатам нагрузочных проб антипирином. Препарат сравнительно быстро и с минимальными потерями всасывается в желудочно-кишечном тракте, равномерно распределяется в жидкостях организма и не более 5% выводится почками в неизмененном виде. Оценку теста проводят на основании показателей периода полувыведения и клиренса. Последний показатель рассчитывают по формуле:
Clr=Vd х 0,693/Т1/2;
где Clr – клиренс (мл/мин); Vd – объём распределения; Т1/2 – период полувыведения (мин); 0,693 – коэффициент элиминации.
Объём распределения рассчитывают по формуле:
Vd= D/C2,
где D – количество вводимого препарата (мг), C2 – концентрация через 2 часа после его введения (мг/мл).
Минимальный уровень клиренса антипирина у телят регистрируют в первые часы после рождения, затем он возрастает на 11% в течение трёх дней, после некоторого снижения у 4-х суточных телят вновь увеличивается в период с 7 до 30 суток.
Таким образом, телята рождаются с сформированными механизмами биотрансформации антипирина, активация которых происходит в первые 3-4 суток после рождения, а становление функции завершается в возрасте 40 суток. Референтными показателями антипириновой пробы являются периоды полувыведения у телят в возрасте 1-4 суток - 18-26 часов, 6-30 суток - 11-22,5 часов и у взрослых животных - 3-9 часов.
Ацетилирование представляет собой процесс конъюгации веществ с активной формой ацетила, который катализируется ферментом ацетилтрансферазой, находящимся в цитозоле гепатоцитов и отвечающим за перенос ацетильной группы с ацетил-КоА на метаболизируемое вещество. В клинической практике часто используют тест с нагрузкой сульфаниламидами, в частности белым стрептоцидом. У клинически здоровых животных независимо от возраста ацетилирующая способность печени составляет 1921%, которая у телят в первые часы жизни на 3-5% выше.
Витамины относятся к группе низкомолекулярных органических соединений, принимают активное участие в обменных процессах, определяя функциональное состояние ферментов и воздействуя на регуляторные механизмы метаболизма.
Известно сравнительно большое количество витаминов и витаминоподобных веществ. Минимальную концентрацию ретинола и β-каротина в крови новорожденных регистрируют до первого кормления (0,08±0,005 мкмоль/л). Через 1-2 часа после приёма молозива их уровень повышается в 2-3 раза. В период с 3 по 7 день жизни на фоне изменения состава корма (молозиво-молоко) наблюдается снижение уровня витамина А в крови, од-
