ультразвукового зонда
Вторым направлением, более совершенным и прогрессивным, является трансцервикальная аспирация ооцитов (ТАО), или по международной классификации «Ovum pick up (OPU)». Сущность данного метода заключается в том, что яйцеклетки получают с помощью ультразвукового зонда (рисунок 5-7). Преимущество данного метода заключается в том, что извлечение можно проводить до двух раз в неделю независимо от стадии полового цикла. Процедуру можно проводить у телок и у коров до первой половины стельности. По некоторым данным на одну операцию можно получить до 8 ооцитов, из которых число пригодных для культивирования составляет около 60%. После оплодотворения и культивирования ранних зародышей на одну операцию получают 1,72 зародыша.
ПОИСК И ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ООЦИТОВ
Для ускорения процесса и облегчения поиска, раствор, в котором происходило выделение ооцитов, пропускается через фильтр Reuch с диаметром 50 мк. После этого полученная жидкость просматривается под микроскопом (Olympus) при увеличении 15-20 крат. Найденные ооциты помещаются в среду для отмывания, содержащую буфер Hepes и позволяющую манипулировать с ооцитами на открытом воздухе без риска изменения рН. Затем клетки отмываются в культуральной среде. После чего проводится оценка их качества (рисунок 8-9, таблица 1).
После оценки качества ооциты помещаются либо в 4-х луночную чашку, либо в чашку Петри 40Ø мм. Также допускается культивирование в небольших (по 5-10 мкл) каплях под минеральным маслом, предварительно калибрированного с культуральной средой в присутствии 5% СО2. Преимущество культивирования под маслом: препятствие попадания в культуральную среду микроорганизмов, микрочастичек пыли, возможность культивирования в небольших каплях среды, что важно при оплодотворении спермой с небольшой концентрацией активных сперматозоидов, а также замедление испарения воды и выход СО2 из среды вне инкубатора. Недостатком является то, что при длительном нахождении вне инкубатора к исходному равновесию влажности и концентрации СО2, займет гораздо больше времени, чем в отсутствии масла.
