А
C
B
D
E
Таблица 1 - Классификация ооцит-кумулюсных комплексов
| № п/п | Морфологические признаки | Оценка |
|---|---|---|
| 1 | Многослойный компактный кумулюс (не менее 3-х слоев) плотно прилегающий к зоне пеллюцида, ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняет прозрачную оболочку, которая равномерная по толщине, апполисцирует, не имеет никаких нарушений, округлая по форме | 5 |
| 2 | Многослойный компактный или разрыхленный кумулюс, плотно прилегающий к зоне пеллюцида, ооплазма имеет участки гранулярной конденсации, прозрачная оболочка округлая, апполисцирующая, не имеет дефектов, равномерная по толщине | 4 |
| 3 | Частично отслоившийся кумулюс, ооплазма имеет участки гранулярной конденсации, прозрачная оболочка равномерная по толщине, округлая по форме | 3 |
| 4 | Ооцит без кумулюса, ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняет зону пеллюцида, прозрачная оболочка округлая, равномерная по толщине | 2 |
Продолжительность дозревания ооцит-кумулюсных комплексов составляет 24 часа. Все манипуляции с клетками проводят или с помощью оттянутых стерильных пастеровских пипеток или же с использованием стандартных заводских пипеток Unopette Оценка качества и зрелости ооцита по его морфолоческому состоянию как правило субъективна и часто не отвечает истинному состоянию ооцита очень часто встречается асинхронность в созревании ядра ооцита, ооплазмы и клеток кумулюса. Однако, другие методы оценки могут привести к повреждению ооцита и его гибели.
СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТ-КУМУЛЮСНЫХ КОМПЛЕКСОВ
Среды, используемые для созревания ооцитов могут быть самыми разными Ham΄s F-10, МЕМ, SOF, Игла и ряд других: однако все они должны отвечать одному требованию: обеспечить качественное созревание ооцитов до стадии оплодотворения (MII). В настоящее время наиболее широко используемой комплексной средой созревания является ТСМ-199 с солями Игла, L – глютамином и 25 мМ Hepes (таблица 2). Непосредственно перед постановкой на культивирования она обогащается 10-20% эстральной сыворотки крупного рогатого скота, или сывороткой плодов коровы в том же объеме, бычьим сывороточным альбумином в концентрации 60 мг/мл, ФСГ-1-10 и эстрадиолом 1-5 мкг/мл Дозревание ооцитов проходит в
