Использование простагландинов для направленной регуляции и коррекции нарушений функции размножения крупного рогатого скота

Продолжение · 10

Свойство ПГF_2α вызывать интенсивные сокращения матки используется для вызывания родов, что важно для синхронизирования отелов, формирования молочных групп. Эффективны инъекции ПГF_2α и при вялых родах, для улучшения отделения последа, для прерывания беременности по ветеринарным показателям [271; 224; 54; 173].

Роды наступают через 30-70 часов после инъекции ПГF_2α [245].

Murray R.D. с соавторами [231] сообщают, что инъекция клопростенола коровам в последние три недели стельности вызывает роды в течение 48 часов, телята рождаются нормальными, жизнеспособными.

Однократная инъекция клопростенола 64 коровам вызывала роды через 47 часов у 95% коров, однако, в 37% случаев требовалась акушерская помощь, 91% телят родились живыми, у 62% коров отмечено задержание последа [244]. Инъекции клопростенола не влияли на продуктивность коров, здоровье и массу телят. Простагландины применяют также для повышения оплодотворяющей способности семени.

По данным Р.Э. Садыкова [и др.], [42] добавление ПГF_2α в семя перед замораживанием повышает его оплодотворяющую способность на 16,1-31,0%.

Однократная инъекция ПГF_2α в шейку матки овец за 1 час до искусственного осеменения способствует лучшему продвижению спермы в их половых путях [159].

Gameik P. с соавторами [203] отмечают, что парентеральное введение эстрофана непосредственно перед осеменением глубокозамороженным семенем, повышает плодовитость овец на 15-18% по сравнению с контролем.

В опытах G.D. Singh, H.C. Pant [340] внутримышечные инъекции по 10 мл ПГF_2α четырем баранам за 1 час до получения семени дважды в неделю в течение 20 дней способствовали увеличению спермопродукции.

Широко применяют простагландины для синхронизации отёлов, опоросов окотов.

С целью синхронизации отёлов в опыте на 18 нетелях использовали энзапрост, отёлы проходили через 38 часов после обработки в сжатый промежуток времени на 279 день стельности [177].

При обработке коров клопрастенолом в последние три недели беременности роды наступают между 36 и 48 часами [243].

Также автором отмечается, что рождается нормальный приплод, но у более половины коров при индуцированных родах наблюдается задержание последа.

При этом состояние здоровья, удой и оплодотворяемость не ухудшаются. Для стимуляции родов у овец простагландины, вводят в дозе 15 мг, начиная, со 149-го дня беременности [287], а двукратная инъекция клопрастенола 100 мкг и 50 мкг через 10 часов вызывала роды через 36±1 час. Все козлята родились живыми и выжили до отъёма [370].

В своих исследованиях авторы используют различные синтетические аналоги простагландина F_2α, разных фирм производителей, при этом отмечается одинаковая высокая эффективность [341; 317]. Использование простагландинов в животноводстве представляет собой ценный биотехнический прием. Тем не менее, несмотря на их высокую эффективность в синхронизации половой циклики,

требуется дальнейшее углубление исследований для повышения синхронности овуляций, улучшения оплодотворяемости.

Требуется разработка приемов использования ПГ для коров и телок с нарушением половой функции.

6.2. Современные представления о роли ПГ в механизме овуляции

В последние годы огромное внимание исследователей сосредоточено на методах контролирования овуляции.

Разработка методов управления овуляцией позволит проводить осеменение в запланированное время.

В последние годы получено много данных, говорящих о непосредственном участии простагландинов в созревании и в овуляции фолликулов, а также в оплодотворении.

В исследованиях, проведённых на морских свинках, установлено, что в фолликулах присутствуют рецепторы простагландина F_2α, которые в норме участвуют в развитии самих фолликулов [355].

Инъекция ПГ в преоптическую область переднего гипоталамуса через 15-20 минут вызывает выделение ЛГ в кровь [296].

Инъекция ПГF_2α коровам и овцам на 4-5 день полового цикла способствует росту и созреванию неатретических третичных фолликулов [200; 373].

Содержание ПГF_2α в фолликулярной жидкости перед овуляцией увеличивается [149; 288; 140].

Shimada K. с соавторами [333] сообщают, что за час до овуляции в периферической плазме крови у кур достоверно увеличивается концентрация ПГF_2α.

Максимальная концентрация ПГ обнаружена в самом крупном фолликуле, который и является главным местом синтеза и высвобождения ПГ в яичнике.

Фолликулярные простагландины могут принимать участие в разрыве стенки фолликула и выделении ооцита.

Установлено, что повышение концентрации ЛГ вызывает волну ПГЕ₂ в яичнике, непосредственно после чего происходит овуляция [165]. Espey L.L. [192] в механизме овуляции центральную роль отводит простагландинам, как медиаторам физиологической воспалительной реакции.

MurdochW.J. с соавторами [289] на основании изучения предовуляторных изменений содержания простагландинов Е и F_2α в фолликулах яичника овец, подтверждают гипотезу Espey L.

К аналогичным выводам приводят и данные других исследователей.

Так, овуляция не происходит у животных, которым инъецировали индометацин (ингибитор синтеза простагландинов), даже при последующих инъекциях экзогенных ЛГ или Гн-РГ [142].

Watson E.D., Harwood D.J. [372] на основании неоднократных ректальных обследований и определения гормонального статуса у коров, у которых длительное время (более 60 дней) не происходила овуляция, полагают, что причиной неспособности к овуляции является нарушение синтеза простагландинов в яичниках.

Инъекция ПГF_2α коровам после осеменения в синхронизированную охоту, повысила оплодотворяемость на 9,6% [283]. Аналогичные данные получены и другими исследователями [206].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Накопленные в последние годы физиологические данные по нейрогуморальной регуляции функции воспроизведения у животных, а также достижения фармакологической промышленности дали возможность направленно воздействовать на все звенья системы гипоталамус – гипофиз – яичники – матка.

Метод направленного регулирования половой функции животных из лабораторного превратился в ценный биотехнический прием, способствующий рациональной организации воспроизводства и увеличению продуктов животноводства.

Хотя исследования по направленной регуляции размножения сельскохозяйственных животных имеют 90-летнюю историю и разрешены многие задачи, в настоящее время еще не до конца решена проблема повышения оплодотворяемости при осеменении в синхронизированную охоту.

В настоящее время гормональные препараты успешно применяются для синхронизации охоты и овуляции у сельскохозяйственных животных, повышения многоплодия у овец и коров, и синхронизации опоросов у свиней.

Применяемые в скотоводстве методы синхронизации охоты – это несомненный прогресс в технологии современного животноводства.

Однако эти методы не лишены недостатков. Так, применение гестагенных препаратов требует продолжительного курса воздействия, сроки синхронного наступления охоты и овуляции растягиваются и оплодотворяемость после осеменения в синхронную охоту низкая.

С открытием ключевой роли простагландина F_2α в лютеолизе, гонадотропин рилизинг-гормона в вызывании овуляции и разработкой методов их химического синтеза появились новые возможности управления процессом воспроизводства у сельскохозяйственных животных.

Несмотря на высокую их эффективность в синхронизации полового цикла требуются дальнейшие исследования для повышения эффективности метода в частности, улучшения оплодотворяемости.

ГЛАВА VII. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОСТАГЛАНДИНОВ ДЛЯ СИНХНОНИЗАЦИИ ОХОТЫ, ОВУЛЯЦИИ И КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ТЕЛОК И КОРОВ

ГЛАВА VII. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОСТАГЛАНДИНОВ ДЛЯ СИНХНОНИЗАЦИИ ОХОТЫ, ОВУЛЯЦИИ И КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ТЕЛОК И КОРОВ

7.1. Материал и методы исследований

С целью разработки методов использования простагландинов для направленной регуляции и коррекции нарушений функции размножения крупного рогатого скота нами были проведены исследования.

Исследования проводили на комплексе «Кутьино» по направленному выращиванию нетелей опытного хозяйства «Щапово» Всероссийского научно-исследовательского института животноводства и в республике Башкортостан. Опытное хозяйство «Щапово» Подольского района Московской области организовано в 1962 году на базе мелких хозяйств. Содержание телок на комплексе «Кутьино» беспривязное, кормление групповое. Корма подаются ленточным транспортером. Концентрированные корма раздаются в смеси с сочными.

В зимне-стойловый период рацион телок случного возраста состоял из 11 кг силоса, 6 кг сенажа, 5 кг сена, 2,5 кг комбикорма, 0,3 л патоки, 60 г соли и 60 г меда.

В летний период вместо грубых и сочных кормов в рацион включали 35 кг зеленой массы.

Исследования в РБ проводили в агрофирмах «Мормылево» Уфимского района, ГУСП «Тавакан» Кургачинского района, агрофирме «Родина» Гафурийского района и ОПХ «Баймакское» Баймакского района.

В первых трех предприятиях содержат коров симментальской породы отечественной селекции, в ОПХ «Баймакское» – зарубежной и отечественной.

Крупный рогатый скот размещен в хорошо оборудованных помещениях с полной механизацией трудоемких процессов. Тип содержания животных привязной.

Комплексы работают по технологии ВГНИИЖа – щелевые полы, подпольное хранение навоза, доение в доильном зале на установке «Тандем», ленточная раздача кормов, приготовленных в кормоцехах в виде мешанок, отёлы в родильных отделениях.

В период лактации животные во всех хозяйст­вах пользовались моционом на выгульных площадках. В сухостойный период животные прогулками и активным моционом были обеспечены.

Кормление животных осуществляли по общепринятым нормам. Корма подвергали химическому анализу для определения содержания перечня необходимых питательных веществ, их количества, соотношений и пригодности к скармливанию.

Таблица 1

Биохимические показатели крови

* - Р<0,05;

** - Р<0,01

Биохимическими исследованиями крови установлено, что показатели содержания каротина, общего белка, неорганического фосфора, сахара и щелочного резерва не выходят за пределы нижних, а кальция и кетоновых тел верхних границ физиологической нормы (табл.1).

Обеспеченность по общей питательной ценности колебалась в пределах 98,4 – 102,1%, кальцию – 100,0 – 119,9%, фосфору – 98,6 – 103,4%, сахару – 98,3 – 101,9%, каротину – 97,8 – 100,0%. Соотношение кальция к фосфору находилось в пределах 1,5 : 2,1, а сахара и протеина – 0,7 : 0,9.

Анализ приводимых данных аргументировал правомочность проведения научно-исследовательских работ в этих хозяйствах.

Для исследования были использованы телки черно-пестрой породы предслучного (14-16 мес.) и случного (16-18 мес.) возраста и коровы симментальской породы с продуктивностью от 3,5 до 5,6 тыс. кг молока за лактацию (рис. 1-2).

Для опытов отбирали клинически здоровых животных – аналогов по возрасту и массе тела.

Размер групп для лабораторных опытов составлял 3-14, для научно-производственных – 20-47 голов.

Учитывали следующие показатели: сроки формирования групп, дату гормональной обработки, синхронность прихода в охоту, количество перегулов и даты осеменений, а также оплодотворяемость от осеменения в первый и второй цикл, число абортировавших животных, продолжительность стельности, количество бычков и телочек в потомстве и число мертворождений.

Все поголовье, сосредоточенное на комплексах, мечено ушными выщипали, полиэтиленовыми бирками и ошейниками с номерами.

Все сведения о подопытных животных заносили в специальный журнал. Учет велся индивидуально по каждому животному.

Телок в охоте выбирали с 6 до 9 и с 15 до 18 часов на выгульных площадках визуальными наблюдениями.

Основным признаком охоты считали рефлекс неподвижности и состояние наружных половых органов. Течку определяли по выделению слизи из половых органов.

Первое осеменение проводили непосредственно после выборки телок в охоте. Перед осеменением и гормональным воздействием ректально обследовали состояние половых органов у телок.

При описании пользовались следующими символами:

- матка (в норме, ригидная, атоничная, слаборазвитая);

- ф – фолликулы, хорошо пальпируемые;

- жт₁ – желтое тело мягкое, в стадии образования (1-го – 6-й дни цикла);

- жт₂ – желтое тело отчетливо выступает над поверхностью яичника, имеет твердоэластичную консистенцию, в стадии максимального развития (7-го – 14 дни цикла);

- жт₃ – желтое тело хорошо пальпируемое, консистенция дряблая, в стадии регрессии (15 – 18-й дни цикла);

- ст. жт. – желтое тело предыдущего полового цикла, слабо прощупываемое.

Осеменяли телок в пункте искусственного осеменения, ректоцервикальным методом.

Сперму получали с Центральной станции искусственного осеменения, с содержанием 50-75% млн спермиев в дозе.

Осеменение телок двукратное с интервалом 10-12 часов.

После осеменения телок выдерживали на пункте 10-12 часов, затем перегоняли в секции накопители, где за ними вели наблюдение.

О произошедшей овуляции при ректальном обследовании судили по наличию овуляционной ямки на месте лопнувшего фолликула, а также по наличию желтых тел через 7-10 дней после осеменения.

Через 45-60 дней телок, не пришедших в охоту после осеменения, ректально обследовали на наличие стельности.

В опытах использовали следующие простагландины и их аналоги:

1. Эстрофан – синтетический аналог простагландина F_2α. Выпускался фармацевтическим объединением «СПОФА» ЧССР в виде бесцветного раствора в ампулах по 2 мл. Содержит 0,25 мг клопростенола (натриевая соль) в 1 мл раствора.

Введение вызывает рассасывание желтых тел. Применяется для синхронизации опоросов у свиноматок, а также при функциональных нарушениях яичников («тихая охота», персистирующие желтые тела, лютеальные кисты), при эндометритах у крупного рогатого скота.

Препарат инъецируется внутримышечно.

Допростон-В-11 – дезоксипростагландин Е1 – синтезирован под руководством доктора химических наук Я.Ф. Фрейманиса в лаборатории простагландинов института органического синтеза АН Латвийской ССР.

Препарат выпускается в ампулах по 5 мл, в 1 мл содержится 5 мг активного вещества в фосфатном буфере, рН раствора 8±0,2. Температура хранения 4⁰С.

Препарат инъецируют внутримышечно.

1. Энзапрост – синтетический простагландин F_2α фирмы «Хиноин» Венгерской Народной Республики. Молекулярная масса – 354,5, эмпирическая формула – С₂₀Н₃₄О₅. Хорошо растворим в спиртах, эфире, тетрагидрофуране, в 0,3 М растворе ацетата натрия, плохо – в воде. Препарат выпускают в ампулах по 5 мл, в водном растворе, содержащем в 1 мл 4,0 мг действующего вещества, 40,8 мг ацетата натрия и 0,1 мл фенола, рН раствора 5,5-6,5.

Энзапрост рекомендуют для вызывания регрессии желтого тела, терапии субинволюции матки у коров и кобыл, вызывания родов у свиней и собак. Препарат инъецируют внутримышечно.

1. Простагландин F_2α отечественного производства – выпускался опытным заводом органического синтеза и биопрепаратов Института химии АН Эстонской ССР в виде соли трис-оксиметил-аминометана. Молекулярная масса 475,6. Температура плавления – 98-99⁰С, выдерживает длительное хранения при 1-4⁰С. Препарат выпускается в ампулах по 5 мл в виде бесцветного водного раствора с добавлением в качестве консерванта 0,9% бензилового спирта, рН раствора 8,0. В ампуле содержится 25 мг ПГF_2α.

Препарат инъецируют внутримышечно.

1. Лютализ-простин F_2α (динопрост) – препарат простагландина F_2α в форме кристаллической соли ТНАМ (трометамин) фирмы Апджон США. Молекулярный вес – 457,60. Белый кристаллической порошок, растворимый в воде при комнатной температуре до концентрации 200 мг/мл.

Выпускается в форме стерильного водного раствора 6 мг/мл, содержащего 0,9% бензилового спирта в качестве консерванта.

Раствор хранится 6 месяцев при комнатной температуре.

1. Анипрост – синтетический аналог ПГF_2α, синтезирован в 1984 году в ВНПО «Витамины». В отличие от зарубежных аналогов данный препарат содержит только l-изомеры.

Выпускается в ампулах по 2 мл в виде бесцветного водного раствора, в 1 мл содержится 125 мкг действующего начала.

1. Эстуфалат – синтетический аналог простагландина F_2α. Синтезирован в 1985 году институтами Химии Академии наук Эстонской ССР, Органической химии АН Латвийской ССР и Химии Башкирского филиала АН СССР.

Препарат выпускается в ампулах по 2 мл в виде бесцветного водного раствора, в 1 мл содержится 250 мкг действующего начала.

Лабораторные исследования

В лабораторных опытах в сыворотке крови радиоиммуно-логическим методом определяли содержание прогестерона.

Динамика прогестерона изучалась для определения оптимальной дозы анипроста и для сравнения эффективности использования анипроста и других аналогов ПГF_2α.

Содержание прогестерона в плазме крови определяли в отделе эндокринологии сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

В этих опытах пробы крови у телок брали с 8 по 12 день полового цикла, перед введением препаратов, а также через 24, 48 и 72 часа после инъекции. В каждом опыте было по 4-9 групп в каждой группе от 3 до 14 телок.

Часть животных была обработана дважды, в первый и во второй цикл. Нами были проведены опыты по изучению гормональной активности желтого тела и дальнейшей воспроизводительной способности телок после многократной обработки простагландинами.

Схемы отдельных опытов и условия их проведения приведены при описании их результатов.

Радиоиммунологический анализ

Изучение гормональных взаимоотношений и роли отдельных гормонов в регуляции репродуктивной функции требует количест-венной оценки гормонов в тканях и биологических жидкостях.

Первые (биологические) методы определения содержания гормонов основывались на увеличении массы или на изменениях в тканях и органах лабораторных животных.

Эти методы очень трудоемки, недостаточно специфичны и недостаточно чувствительны.

На смену биологическим методам пришли методы связывания.

В них определение количества гормона производилось на постепенном насыщении специфического связывающего агента гормоном и последующем измерении его распределения между «свободной» и «связанной» фазами.

Одним из таких методов является радиоиммунологический.

Радиоиммунологический метод впервые был предложен для определения эндогенного инсулина в плазме крови человека.

Главное отличие радиоиммунологического метода от биологического состоит в том, что о количестве анализируемого вещества судят, не по его биологической (функциональной) активности, а по количеству комплекса, образовавшегося при взаимодействии этого вещества с так называемым агентом.

К преимуществам радиоиммунологического метода определения гормонов относятся: высокая чувствительность (до 10^-9-10^-12 г/мл гормона), специфичность, надежность, точность, простота и высокая производительность, он позволяет определить содержание в биологических жидкостях не только гормонов, но и ферментов, рецепторных белков и ряда лекарственных веществ.

В радиоиммунологическом методе используется комбинация двух веществ, одно из которых называют связывающим агентом, а другое (количество которого измеряют) – лигандом [122]. Радиоиммунологический метод основан на законе действия масс, в соответствии с которым определяемое вещество будет конкури-ровать со своим меченым аналогом (антигеном) за ограниченное число связывающих мест до достижения химического равновесия всех компонентов реакционной смеси [114].

В каждую пробирку с исследуемым образцом добавляют одинаковое количество антител и меченого гормона.

Чем больше определяемого гормона в образце, тем большее количество антител будет связано с немеченым гормоном и тем меньше будет радиоактивность комплекса гормон-антитело.

Сравнивая радиоактивность комплекса гормон-антитело и радиоактивность его в серии пробирок с известными стандартными разведениями определенного гормона можно судить о количестве гормона в исследуемом образце.

В своих исследованиях мы пользовались готовыми наборами реактивов для радиоиммунологического определения прогестерона в сыворотке крови человека «СТЕРОН-П¹²⁵I», которых выпускал институт биоорганической химии АН Белорусской ССР [106].

В набор «СТЕРОН-П¹²⁵I» входят:

1. Йод-125-прогестерон, 100 кбк (килобеккерель);
2. – 6 калибровочных проб сыворотки крови, с концентрацией прогестерона от 0 до 100 нмоль/л;
3. – концентрированный буферный раствор, рН 3,8, 10 мл;
4. – антисыворотка к прогестерону;
5. – суспензия активированного угля, покрытого декстраном,

10 мл.

Реактивы поставляются в лиофилизированном виде (кроме активированного угля). Набор рассчитан на проведение анализа 43 неизвестных и 6 калибровочных проб в дубликатах.

Анализ состоял из следующих этапов:

а) во флаконы с меченым прогестероном и антисывороткой добавляли по 11 мл буферного раствора, каждый флакон с извест-ной концентрацией прогестерона – по 1 мл, а на каждую 0,1 мл пробу анализируемой сыворотки по 0,5 мл тщательно перемешивали;

б) после переноса активированного угля в стакан емкостью 100 мл и добавления 50 мл дистиллированной воды, помещали его на магнитную мешалку, а в чистые пробирки, обозначенные № 1-16, разливали по 0,1 мл прогестерона с известной концентрацией;

в) внесли по 0,1 мл раствора, разбавленного буфером пробы анализируемой сыворотки, в аналитические пробирки, обозначенные № 17-102, затем во все пробирки разлили по 0,1 мл антисыворотки, все пробирки встряхнули на вихревом смесителе;

г) после добавления 0,1 мл меченого прогестерона и тщатель-ного перемешивания проводили 2-х часовую инкубацию при комнатной температуре и 15-минутную в ледяной бане при 0-4⁰С;

д) в каждую пробирку приливали по 0,5 мл раствора активированного угля и выдерживали 10 минут в ледяной бане периодически перемешивая;

е) все пробирки центрифугировали при ускорении 1500-2000 об/мин в течение 10 минут, после чего с каждой пробирки отобрали по 0,5 мл над осадочной жидкости и переносили в пробирки для счета.

Всех пробирок поместили в гамма-счетчик РИА-300 американской фирмы «Тракор Аналитик». Гамма счетчик имеет цифровой калькулятор и телетайп.

Радиоактивность, выраженная в импульсах в минуту, набиралась цифровым калькулятором против соответствующей концентрации прогестерона и по полученным точкам строилась калибровочная кривая.

Путем сравнения со стандартом и с калибровочной кривой счет каждого образца преобразуется в концентрацию гормона в миллилитре.

7.2. Результаты собственных исследований

7.2.1. Определение эффективной дозы отечественного аналога ПГF_2α - анипроста

Перевод животноводства на промышленную основу требует применения прогрессивных методов разведения.

Возникает необходимость подчинить репродуктивные процессы коров и телок технологическим циклам производства, календарного регламентирования прихода в охоту, овуляции и оплодотворения для ритмизации последующих производственных циклов – запуска, отела, выращивания молодняка и др.

В последние годы для направленной регуляции репродуктивной функции самок сельскохозяйственных животных практическое применение нашли ПГF_2α и его синтетические аналоги, которые вызывают быстрый лизис желтого тела с последующей овуляцией.

В 1984 году ВНПО «Витамины» синтезировало новый препарат простагландина – анипрост. В отличие от зарубежных аналогов данный препарат содержит только α – изомеры.

Целью наших опытов в разделе 7.2.1. было испытание данного препарата в лабораторных и научно-производственных опытах на телках предслучного и случного возраста, основной задачей было определение эффективной дозы анипроста.

Продолжение · 12

7.2.1.1. Оценка лютеолитической активности различных доз анипроста в сравнении с другими препаратами простагландина

Для опыта были сформированы 9 групп телок по 3 головы в каждой группе. На 9-10 день полового цикла животным вводили различные препараты простагландина в разных дозах.

Кровь для анализа на прогестерон у телок брали перед и через 24, 48 и 72 часа после введения простагландинов.

Контрольным животным инъецировали физраствор.

По скорости снижения концентрации прогестерона судили о лютеолитической активности препаратов. Результаты опыта представлены в таблице 1 и на рисунках 3 и 4.

Через 24-72 часа после введения препаратов происходило снижение уровня прогестерона в крови телок. Наблюдалась прямая связь между дозой препарата и скоростью снижения концентрации прогестерона в крови [8].

В этой связи интересно проследить динамику снижения концентрации прогестерона в крови при использовании анипроста в различных дозах (табл. 2).

Увеличение дозировки анипроста с 50 до 240 мкг ускорило снижение концентрации прогестерона в крови у телок в течение суток с 59,9 до 85,3%.

У телок I-III групп (табл. 1) увеличение концентрации прогестерона через 48 и 72 часа после инъекции (в сравнении с концентрацией через 24 часа), по-видимому, связано с недостаточностью дозировок для вызывания полного лютеолиза.

Таблица 1

Концентрация прогестерона в сыворотке крови телок после введения различных простагландинов

х – Р <0,05; хх – Р <0,01

Отмечены некоторые особенности снижения концентрации прогестерона под действием эстрофана и анипроста в дозе 240 мкг. Концентрация прогестерона в крови под действием эстрофана и анипроста через 24 часа понизилась на 55,1 и 85,4%, через 48 – 70,7 и 92,7%, через 72 – 71,1 и 99,0% от исходного уровня соответственно.

Через 24, 48 и 72 часа после инъекции полного аналога нативного ПГF_2α, концентрация прогестерона понизилась на 55,2; 52,8 и 55,8% соответственно.

Таблица 2

Характер снижения концентрации прогестерона в сыворотке крови телок через 24 часа после инъекции анипроста в разных дозах

Инъекция допростона-В телкам не вызывала значительных изменений содержания прогестерона в крови.

На основании проведенных радиоиммунологических исследо-ваний нами установлена высокая лютеолитическая активность анипроста.

7.2.1.2. Синхронизирующий эффект различных препаратов

простагландинов

Для более полной оценки биологических свойств отдельных простагландинов нами были проведены исследования на циклирующих телках случного возраста.

Для исследований были сформированы 10 групп по 5-6 телок.

На 9-10 день полового цикла телкам инъецировали испытуемые препараты в разных дозах, и в течение 5 дней проводили выборку в охоте. У животных, пришедших в синхронизированную охоту, учитывали продолжительность полового цикла.

Результаты опыта приведены в таблице 3 и на рисунке 5.

Рис. 5. Приход в охоту телок после введения различных простагландинов

Проведенные исследования показали, что допростон-В не обладает

Таблица 3

Приход телок в охоту после введения различных препаратов простагландинов

синхронизирующим эффектом, даже при увеличении дозы в два раза.

Внутримышечное введение телкам ПГF_2α Латвийского производства сихронизировала охоту у 50-60% животных.

При инъекции смеси допростона-В и ПГF_2α телкам, синхронность прихода в охоту была очень низкой.

Так инъекция смеси допростона-В и ПГF_2α телкам синхронизировала охоту лишь у 16,7% животных.

Высокая синхронность по приходу в охоту (80,0-83,4%) получена при использовании анипроста.

Повышение дозы анипроста ускоряет наступление охоты у телок: при дозах 100 и 140 мкг пик охоты приходится на 96-120 часов, а при дозах 200 и 240 мкг – 48-72 часа.

7.2.1.3. Испытание различных препаратов простагландинов по скорости снижения уровня прогестерона в сыворотке крови у телок

Для подтверждения полученных в предыдущих опытах данных были проведены дополнительные исследования.

За подопытными телками вели наблюдение в течение двух половых циклов, что позволило точно определить продолжительность полового цикла каждого из них.

Было сформировано 4 группы по 8 телок, каждая группа была разделена на подгруппы «а» и «б».

На 9 день полового цикла и повторно через 11 дней телкам подгрупп «а» вводили различные препараты простагландинов, кровь брали перед и через 24, 48 и 72 часа после инъекции, телкам подгруппы «б» препараты вводили, начиная со второго цикла.

У животных контрольной группы кровь брали на 9 день и повторно в середине следующего полового цикла.

Результаты опыта представлены в таблицах 4 и 5 и на рисунках 6-8.

Таблица 4

Концентрация прогестерона в сыворотке крови телок после введения различных простагландинов

х – Р <0,05; хх – Р <0,01

Концентрация прогестерона в сыворотке крови телок контрольной группы в течение опытного периода существенно не изменялась. Инъекция анипроста телкам в первый цикл вызвала более резкое снижение концентрации прогестерона в крови через 24, 48 и 72 часа на 78, 93 и 97%, чем инъекция эстрофана на 64, 66 и 75% соответственно.

При повторной инъекции, через 24 часа анипрост вызывал более резкое снижение концентрации прогестерона, чем эстрофан, однако через 48 и 72 часа скорость снижения содержания прогестерона у телок, обработанных анипростом, была ниже, чем эстрофаном.

Так, если через 48 и 72 часа после инъекции эстрофана в крови у телок выявлены лишь следы прогестерона, то после введения анипроста остаточный уровень прогестерона у телок составил 15,6 и 11,0% соответственно.

Рис. 7. Уровень прогестерона в сыворотке крови телок в нг/мл после введения различных простагландинов (II-й цикл)

Инъекция допростона-В не влияла на содержание прогестерона в крови телок.

Во второй цикл у некоторых животных уменьшалось содержание прогестерона, у других увеличивалось.

В лютеальную фазу индуцированного цикла, содержание прогестерона в крови телок, обработанных эстрофаном и анипростом, было выше на 30 и 45% соответственно, по сравнению с контролем.

Пик прихода телок в синхронизированную внутримышечным введением эстрофана и анипроста охоту приходился на 48 часов и составил 66,7 и 75,0% соответственно.

Таблица 5

Приход телок в охоту после введения различных препаратов простагландинов

Синхронность прихода в охоту телок после инъекции эстрофана и анипроста составила по 91,7%.

Средняя продолжительность полового цикла телок сихронизи-рованных введением эстрофана и анипроста составила по 11,3 дня.

После введения допростона-В телки признаков синхронизированной охоты не проявили.

Разницы по синхронности прихода в охоту и продолжительности полового цикла у телок, обработанных эстрофаном и анипростом, не обнаружено (табл. 5).

Результаты исследований подтвердили высокую лютеолитическую активность анипроста в дозе 250 мкг.

• • • 1. Сравнительная оценка лютеолитической активности

анипроста и аналогов ПГF_2α зарубежного производства

Для сравнительной оценки лютеолитической активности анипроста с препаратами ПГF_2α зарубежного производства в рекомендуемых дозах был проведен следующий опыт.

Были отобраны 4 группы по 3 телки в каждой. На 9-10 день полового цикла телкам вводили различные препараты простагландинов, и брали пробы крови перед и через 12, 24, 48 и 72 часа после инъекции.

У телок контрольной группы кровь брали в те же сроки.

В образцах крови радиоиммунологическим методом определяли содержание прогестерона (табл. 6 и рис. 5).

Все использованные аналоги ПГF_2α вызывали снижение концентрации прогестерона в сыворотке крови телок через 12-78 часов (табл. 6 и рис. 9).

Таблица 6

Динамика прогестерона в сыворотке крови телок после обработки различными препаратами простагландина F_2α