используют прибор экспресс диагностики мастита фирмы Драмиски при его использовании одно условие – для сравнения необходимо, чтобы у коровы были здоровы 1 или 2–3 доли и прибор ПЭДМ (рисунок 8).
Порядок работы с прибором ПЭДМ. После промывания четырех датчиков 0,5%-м раствором моющего средства и вытирания насухо их заполняют молоком из соответствующих долей вымени выше уровня верхнего края цилиндрической части (1–2 мл). После нажатия кнопки включения прибора должен светиться индикатор работы и индикаторы молока долей вымени, пораженных маститом (красным светом), зеленый свет Рисунок 8 – Прибор ПЭДМ или отсутствие свечения лампочки – отрицательный результат. После удаления молока датчики промыть теплой водой и протереть насухо, затем приступить к исследованию следующего животного.
Подсчет соматических клеток (лейкоцитов) в молоке. Можно осуществлять методами Прескотта-Брида, Ньюманса, М. П. Рязанского, И. И. Архангельского с соавт., Н. М. Хилькевича. Наиболее приемлемыми являются последние два метода, но при исследовании молока в течение первых суток целесообразно использовать метод Н. М. Хилькевича – он достаточно точен и прост. Сущность этого метода заключается в следующем. В пробирку наливают 0,4 мл разведенной краски Гимза (1 мл дистиллированной воды и 5 капель краски) и 20 мм3 исследуемого секрета вымени, получают разведение 1:20. Через 15–30 мин или 1 ч заполняют счетную камеру с сеткой Горяева разбавленным молоком. Лейкоциты подсчитывают во всей сетке (если их мало) или в пяти рядах (если лейкоцитов много), или в 5 больших квадратах (если лейкоцитов очень много). Для определения числа
клеток в 1 мм3 подсчитывают лейкоциты в одном большом квадрате и результат умножают на 5000 (для пересчета количества лейкоцитов в 1 мл молока полученное число умножают на 1000).
2.3 Микробиологическое исследование молока
Бактериологическое и микологическое проводят с целью выявления конкретных возбудителей мастита и определения их чувствительности к антимикробным препаратам, применяемым для лечения. Пробы молока (отдельно из каждой четверти по 10 мл) необходимо брать в стерильные пробирки в конце доения с соблюдением правил асептики (обмывание вымени, обработка рук и сосков ватным тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, сосок не должен касаться края пробирки). Доставка проб секрета вымени в ветлабораторию осуществляется в течение 3–4 ч с момента его взятия в термосах со льдом; в лаборатории для выделения и идентификации микрофлоры осуществляется посев секрета на элективные твердые питательные среды с последующим изучением культуральных, биохимических, морфологических, тинкториальных, патогенных, серологических свойств микроорганизмов выросших и изолированных колоний. Методами диффузии в агар и серийных разведений антимикробных веществ определяют чувствительность к ним выделенных возбудителей мастита.
При проведении научных исследований в лабораторных условиях также определяют титр лизоцима молока, фагоцитарную активность лейкоцитов молока и ряд других показателей качества молока.
Определение наличия и концентрации лизоцима молока проводится путем чашечной титрации на агаре с луночками (по В.И. Мутовину). Обычно при мастите в молоке отмечается уменьшение или отсутствие лизоцима. В качестве питательной среды берут мясо-пептонный агар (МПА), рН которого 7,2. МПА разливают в чашки Петри слоем 2,5–3 мм, среду подсушивают, выдерживая при температуре 2...6 °С в течение 18–24 ч. В качестве тест – микроба используют культуру золотистого стафилококка штамма ВМ (ветка молочная), получаемую во Всероссийском НИИ
санитарии, гигиены и экологии. Суточную бульонную культуру тест-микроба разводят стерильным физраствором 1:10000 и вносят по 0,25 мл в каждую чашку для титрации, тщательно распределяя по всей поверхности среды. Чашку оставляют при комнатной температуре на 30–40 мин, затем в агаровых пластинках стерильной тонкостенной стальной трубкой диаметром 10 мм делают луночки (в одной чашке Петри можно разместить 4–7 луночек). В каждую луночку вносят по 2 капли испытуемого секрета вымени, выдерживают 18 ч при комнатной температуре (22...23 °С) и 5–6 ч в термостате при 37 °С, а затем учитывают результат титрации .
Обычный рост культуры непосредственно у луночки, в которую внесен испытуемый материал, обозначают знаком «О», что означает отсутствие в исследуемом секрете титруемых количеств лизоцима. Если рост культуры около луночек значительно слабее густоты культуры в удалении от луночек, то такой результат обозначают термином «ЗУР» (зона угнетенного роста). При наличии ЗУР более 14 мм перед указанным знаком отмечают величину диаметра зоны угнетенного роста. Если ЗУР имеет диаметр 14 мм и менее, то результат обозначают термином «СЛ» (следы). При наличии в испытуемом молоке достаточных концентраций лизоцима вокруг соответствующих луночек видны кольцеобразные зоны задержки роста (ЗЗР), свободные от колоний тест культуры. Степень активности лизоцима молока учитывают по величине диаметра кольца ЗЗР.
Определение фагоцитарной активности лейкоцитов молока (по Н. К. Оксамитному) проводится так. В стерильную пробирку вносят 0,5 мл исследуемого молока с добавлением 0,5 мл взвеси штамм золотистого культуры стафилококка (патогенный стафилококка 1501) или кишечной палочки. Взвесь культуры получают путем смыва физиологическим раствором суточной агаровой культуры тест-микроба, подогретой при 70 °С в течение 30 мин. Концентрацию взвеси доводят по оптическому стандарту до 1 млрд. микробных тел в 1 мл. После перемешивания молока со взвесью культуры пробирки ставят в термостат при 37 °С на 30 мин. Затем из смеси молока с микробной культурой готовят
