5 минутЕ прик, комнатпойизмеряют окраскутемпературе.и сравниваютПользуясьсофильт-станpon 6 ммк, измеряют окраску и сравнив: 2 vernountia в 100 мл 0,1 н. HCL. Для стандартной кривой готовят раствор из 40 мг Определение тринтофана. Триптофаи разрушается при кислотном гидролизе, поэтому ero пе определяют хроматографическими способами, используемыми для анализа амипокислот в кислотпых гидролизатах. Химический метод определения тринтофана основан на | сго свойстве давать с парадиметиламинобензальдегидом | окраску,нейтрации интеами н окислосивнос т ьы. которой пропорциональнар кон|| Реактивы: 9,5%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида в 10%-пой серной кислоте, гидролизат жела| rina (35 мг желатина кипятят 2 часа в колбе с обратным холодильником с 2 мл 1 в. NaOH), 2%-ный раствор изотнокислого натрия, 50%-ный этиловый спирт, концеитрированная HCl. Ход определения. 10—20 мг белка гидролизуют 2 часа на слабом огне при помощи 2 мл гидролизата желаТИНЫ у 25%-ногоК охлажденномураствора парадиметиламинобензальдегида,гидролизату добавляют 0,5 мл | затем 0,2 мл 2%-ного раствора азотнокислого натрия и | — | 14 мл концентрированной HCl. Через час быстро прили| вают 15—90 мл 50%-ного спирта, взбалтывают и переносят в колбочки на 50 мл, доводя тем же спиртом объемкомпонентов,до метки.кромеКонтрольнуюиспытуемогопробуобразца.готовят из тех же | Полученноери значение» экстинции сравниваютя с кали| бровочной кривой, которую ВЫВОДЯТ из стане иоге ряда, получаемого из раствора 100 мг триптофана в | 100 мл дистиллированной воды. Из него готовят несколъко растворов с содержанием от 0,1 до 0,6 мг триптофана | в 1 wat. Каждого раствора берут по | мл, добавляют | 0,5 мл 2.5%-Horo раствора, парадиметиламинобенааль. | дегида, 0,2 мл 2%-ного раствора нитрата натрия и 4014 мипутмл концентрированнойнагревают в бане присоляной40°,о доливаюткислоты.15-20Затеммл 50%-ного спирта и доводят объем до 50 мл. По изменениюоткладываяо экстинциипо осиэтихординатрастворовоптическуювычерчиваютплотность,кривую,а :по оси абсцисс концентрацию триптофана. ] А Н, А, Шмапенков 49 | | |
Определение глицина. Для всех Животных, кроме цыплят, глицин является заменимой аминокислотой. Поэтому на его содержание во всех рационах, кроме птичьих, почти не обращали внимания. Однако, как значениевыяснилось в последнее время, глицин имеет большое пика для всех животных в качестве важного источет на такэффективностьназываемогоазотазаменимогонезаменимого.азота, который влия`Глицин дает с хромотроповой кислотой в присутствии серной окрашенный продукт, по концентрации которого судят о содержании аминокислоты. в воде,Реактивы:1%-Hbiii5%-ныйводныйрастворраствор хромотроповойнингидрина, фосфатныйкислоты буфер с pH 5,5 (который приготовляют из 3,5 г КзРО., 100 мл 20% -ного раствора KH»PQ,) и концентрированная серная кислота. 100Ходмл помещаютопределения.0,5 млВ гидролизатаколбу Кьельдалябелка, 2 объемоммл фосник C 5 мл воды отгоняют 7 мл раствора и ставят его в ледянуюфатного буфераводу. Виколбу| мл наливаютраствора нингидрина.5 мл воды иВвыпари-приемвают содержимое досуха, собирая дистиллят в тот же приемник. Объем дистиллята доводят водой до 95 мл, после перемешивания берут 5 мл в пробирку, в которую после охлаждения до O° постепенно вводят 4 мл концентрированной серной кислоты. Смесь выдерживают до комнатной температуры и затем добавляют 3 капли раствора хромотроповой кислоты, взбалтывают и держат в кипящей воде 30 минут. После охлаждения фотометрируют с фильтром 560 ммк. Расчет проводят по калибровочной кривой, которую строят по данным анализа известных концентраций глицина.Белок гидролизуют так же, как для определения метионина.
Хроматографические методы Большие изучении успехи, достигнутые за последние годы в питания, многихаминокислотногобелков органовсоставаи тканейкормов,растенийпродуктови животных, свойств отдельных аминокислот и т. д., связаны с применением хроматографических методов исслсдования.
Aa
‚ лежитВ основеразработанныйсовременныхв началехроматографическихХХ века русским методовученым М. С. Цветом метод разделения смеси раствореппых, близких в химическом отношении веществ избиратсльной адсорбцией на столбике адсорбеита. До Цвета считали, что в зеленых частях растеций. содержится только один пигмент хлорофилл. Цвет приготовил водную вытяжку пигмента растений и peшил его отфильтровать «через столбик окиси аммония», помещенного ‘cn в стеклянную трубку или колонку, О ини как показано на рисунке 1. О eavpepure Оказалось, что в результате su) фильтрования пигмент листьев разт делился, по крайней мере, на четыИН ре вещества, распределившихся на ИХ — разных высотах столбика адсорНЫ бента. в После анализа было установБАЦ “проти содержит определенное вещество В лено,Начинаячтосверхукаждаяэтимизонавеществамиокраски i оказались ксантофилл, затем хло— рофилл, В-каротин и оа-каротин. И Они осели на поверхности частиц bi окиси алюминия, но вследствие | `\ разной способности к адсорбции Mes Waa они распределились в разных Me(ey стах колонки. <= Со временем было испытано огPitt! 1. Anéopoivionромное количество адсорбентов, пая оп og разных форм сосудов для адсорбM. С Цвету после ции ит. д. В настоящее время хропрохождения pactroматографический анализ очень ЙА пигмента из лимногих смесей веществ, в том чис oe ле аминокислот, проводят на бумаre (бумажная хроматография) и на колонках (колоичагая хроматография). При этом было выяснено, что хроматография основана на адсорбини (адсорбционная хроматография) и распределении веществ между несмешительнаявающимисяхроматография).растворителямиПо-видимому,пли фазамиочень(распредели-часто оба ; а netic 5 эти принципа действуют одновременно.
4*
51
