Часто аминокислоты с близким зиачепием ВТ при первом хроматографировании дают общее пятно. Чтобы разделить такие аминокислоты, тот же растворитель пропускают два и больше раз или же используют другой растворитель. Для разделения аминокислот, образующих общие WITHA ири одпомериом хроматографировании, то есть при пропускапин раствортеля только в одном направлении, применяют двухмериое хроматографирование, то есть в двух перпендикулярных друг другу направлениях. Диля этого бумагу с одпомерной хроматограммой поме-
реке 8 щаютемв лодочкум сарас=e У во eropbitl —=Е^—}pe тому краю, i | % был погружен в рас име hepuom Rpesad@rpatin uy a YE р “I atl ; ровании. Оборудование для гПе" | хроматографии аминоeeamaй 2 ществуеткислот на бумаге.много Cy- BH| ee дов хроматографичеРис, ских камер, одна из 3. Хроматографическая камера: HHX, предназначенная ee камеры его парами Лодовдля нисходящей хрокаToneкой 2 укрепленаeC наОйстоликеион3. Листы Р, Матографии,На рисунке 3. показанаПри Boc4 Фронт нисходящей фазы на бу ходящей хроматограMare обозначен цифрой 6. фии лодочка в камере камеры.жную фазуНа рисункеналивают4 показаныв сосуд, которыйнемикропипеткитребуется,м ставятадляпаподви-днонанесения проб гидролизата на бумагу Точность расчета, а следовательно, и определения аминокислот методом хроматографии па бумаге во миогом зависит от правильного взятия пробы. Концентрация испытываемых веществ должна быть слабой и объем пробы небольшой. Поэтому требуется Touran калибровка микропипеток и аккуратное нанесение образца па бумагу. Обычно удовлетворительпые результаты получают при пользовании пипетками, применяемыми для анализа крови. Для удобства часто микропипетку у
`° делают с микровинтом, при помощи которого капля выдавливается весьма точно. Разгонку аминокислот и об. работку бумаги проводят в вытяжном шкафу. Растворители. При хроматографии аминокислот па бумаге применяются следующие растворители. Фенольный растворитель. Смешивают восемь объемов фенола с тремя объемами дважды дистиллированной оды, Технический фенол предварительно перегоняют при атмосферном давлении с воздушным холодильником.12 млДляводы,этого100в мгперегоннуюалюмиколбу берут 100 г фенола, пиевого порошка и 50 мг двууглекислого натрия. у Смесь фенола с водой нейЕ тральна, в темноте сохра ияется несколько месяцев. Бутилово-уксусньй растворитель. Его применяют *?° свежим, поэтому гото 15 вит Tener ева: Предварительноpea употреблением.бутиловый ® спирт отгоняют, собирая $ фракцию в днапазоне 116 120°С. Ледяная уксусная кислота должна быть хи[4 6 6 2 мически чистой. Раствори- ам oe ; тель готовят из девяти — Hecenng м проб На бума объемов бутилового спира тематологическая; 6 — atuxyoTa, одного объема ледяной пипетка по Линдерстрему-Лангу 1 суксуснойполовинойкислотыобъемови биди-дв ух пробкой;Холтеру:Мейнхарду„®—^г микропипеткамикропинпеткаи Хэллу. вос стиллята. Бензил-третичнобутиловый растворитель состоит из пяти объемов бензилового, пяти объемов третичного спирта и двух объемов бидистиллята. Спирты предварительно очищают перегонкой. Реактивы. Коллидин. Применяют без других компонентов. Продажный препарат перегоняют с добавлением концентрированной соляной кислоты. Отбирают фракцию, перегоняющуюся при 169—170°. Хранят H используют в темноте. Натрий-фосфатный раствор. Готовят 1 М раствор фосфата натрия. Для удаления тяжелых металлов этот
а раствор встряхивают с насыщенным раствором А в четыреххлористом углероде (25 мл раствора on на | a раствора фосфата натрия). Из этого осповно раствора готовят 0,01 M и 0,04 М ‚растворы. ЗОВ ру фосфатаНатрий-фосфатныйнатрия, приготовленного,буфер, РН 2,5. какК 0,04у Hagaha1 теBu добавляют копцентрированную фосфорную кислоту получения раствора с pH 2,5. . ратНингидрин.пригоден дляВыпускаемыйработы без промышлениостьюочистки. пре Нингидриновые реактивы следующие: a6 Открывающий раствор — 0,05%-ный раствор в аб лютном1. 2%-пыйметаноле.раствор ниитидрина в 95%-пом4 этано, к которому добавлено 2% смеси из ледяпой уксус кислоты и коллидина (5:1). Раствор применяется то ко свежим. из 2.девяти2%-ныйчастейраствор95%-ноговингидринаэтанола ви смеси,одной частисостояк лидин-уксусной кислоты (5:3). ют 3.в 20[ млмгсмесинингидринаметилцеллозольва и 2 мг гидриндантинас натрий-ацетатраство буфером, РН 4,60 (1:1). 4. 4$ -ный раствор нингидрина в смеси, состоя из девяти объемов бутилового спирта, одного объ 6 М фосфорной кислоты. 5. 4% -ный раствор в смеси из девяти объемов бу лового спирта и одного объема | и. фосфорной кис ты. Готовят перед использованием. . лымМетилцеллозольвжелезом. Храняточищаютего приперегонкойкомнатнойнадтемператсернок 1--2 месяца, при температуре минус 20° —- приме полгода. . Буферный раствор с pH 4,6. К молярному| ра уксуснокислого натрия добавляют ледяную уксус кислоту до получения РН 4,6. 7 sour Едкокалиево-боратный буфер. 9,28 г борной и растворяют в 100—150 мл абсолютного метанола. ливают 32,5 мл 6 н. едкого кали и объем смеси дово метанолом до 500 мл. Ледяная уксусная кислота (химически чист 95% -ный этиловый спирт перегоняют из лимонной ‘оты, 56
