ДИАГНОСТИКА МУТАЦИИ BLAD (ВРОЖДЕННОГО СИНДРОМА ИММУНОДЕФИЦИТА) ГЕНА CD18

BLAD-синдром (дефицит лейкоцитарной адгезии или синдром врожденного иммунодефицита) – генетически детерминированное заболевание с характером наследования по рецессивному типу, приводящее к разрушению иммунной системы животных. Обусловлен точковой мутацией в кодирующей части аутосомного гена CD18, расположенного на первой хромосоме КРС и контролирующего синтез гликопротеина β -интегрина – поверхностного белка мембраны нейтрофилов, играющего ключевую роль в миграции лейкоцитов к очагу воспаления. Повреждение структуры этого белка приводит к множественным дефектам функции лейкоцитов, миграция которых к месту проникновения патогенов оказывается заблокированной, что исключает эти клетки из процесса уничтожения инфекции.

В гомозиготном рецессивном состоянии является летальным: у телят резко снижаются защитные свойства организма, их иммунная система не способна противостоять вирусным и бактериальным инфекциям, что приводит к гибели животных обычно в раннем возрасте (до года). Наиболее часто наблюдаются нарушения респираторной функции и функции желудочно-кишечного тракта. В гетерозиготном состоянии клинических проявлений не выявлено.

Праймеры для амплификации фрагмента гена CD18:

BLAD1: 5′ -TgA gAC CAg gTC Agg CAT TgC gTT CA- 3′ BLAD2: 5′- CCC CCA gCT TCT TgA CgT TgA CgA ggT C -3′

ПЦР-программа: 93 °С – 5 мин; 35 циклов: 93 °С – 1 мин, 60 °С – 1 мин, 72 °С – 1 мин; 72 °С – 5 мин.

Длина амплифицированного фрагмента – 132 п.о.

При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой TaqI при 65 °С идентифицируются следующие генотипы:

генотип CD18^TL/TL – 71 и 61 п.о. (животные, свободные от мутации) генотип CD18^BL/TL – 132, 71 и 61 п.о. (животные-носители мутации) генотип CD18^BL/BL – фрагмент 132 п.о. (животные с рецессивным генотипом)

ДИАГНОСТИКА МУТАЦИИ DUMPS (ДЕФИЦИТА УРИДИНМОНОФОСФАТСИНТЕТАЗЫ) ГЕНА UMPS

DUMPS (дефицит уридинмонофосфатсинтетазы) – моногенное аутосомное рецессивное заболевание. Болезнь обусловлена нарушением обмена веществ и проявляется дефицитом фермента уридинмонофосфатсинтетазы, связанного с воспроизводительной функцией животных и влияющего на выживаемость потомства.

Заболевание обусловлено точечной мутацией в кодирующей части гена UMPS, локализованного на первой хромосоме (1-я группа сцепления, локус 2391) и проявляется только у гомозиготных животных, вызывая гибель эмбрионов, как правило, после первых 40 дней развития, то есть на стадии имплантации зародыша в матку. У носителей данной мутации отмечают задержку роста. Также может наблюдаться проявление дефектов функционирования нервной системы организма животных.

Мутация зарегистрирована у черно-пестрых голштинов в США и Европе, а также у животных красно-пестрой голштинской породы в Швейцарии. Данный фермент связан с воспроизводительной функцией животных и влияет на выживаемость потомства.

Праймеры для амплификации фрагмента гена UMPS:

AVA1: 5´- gCA AAT ggC TgA AgA ACA TCC Tg - 3´ AVA2: 5´- gCT TCT AAC TgA ACT CCT CgA gT- 3´

ПЦР-программа: 95 °С – 10 мин; 45 циклов: 95 °С – 30 с, 58 °С – 30 с, 72 °С – 1 мин; 72 °С – 30 мин.

Длина амплифицированного фрагмента – 108 п.о.

При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой EcoT22І

при 37 °С идентифицируются следующие генотипы: генотип DUMPS^TD/TD – 51 п.о., 36 п.о. и 21 п.о. (животные, свободные от мутации) генотип DUMPS^TD/DP – 87 п.о., 51 п.о., 36 п.о. и 21 п.о. (животныеносители мутации) генотип DUMPS^DP/DP – 87 и 21 п.о. (животные с рецессивным генотипом)

ДИАГНОСТИКА МУТАЦИИ CVM (СИНДРОМ СЛОЖНОЙ ДЕФОРМАЦИИ ПОЗВОНОЧНИКА) ГЕНА SLC35A3

CVM (синдром сложной деформации позвоночника) – наследственное летальное заболевание телят, ассоциированное с геном SLC35A3 (бычьего растворимого переносчика семейства 35. Ген, обуславливающий комплексный порок позвоночника расположен на третьей хромосоме. Способ наследования CVM – аутосомально рецессивный. Характерными признаками телят-носителей CVM являются общая недоразвитость, укороченная шея, слившиеся и деформированные позвонки, сколиоз, пороки ребер. Одним из симптомов является также деформация суставов передних и задних конечностей. К действию этого рецессивного гена относятся, кроме того, пороки сердца.

Бычий транспортер SLC35A3 играет важную роль в развитии осевого скелета, принимая участие в молекулярных механизмах формирования позвоночника и ребер. Геномная ДНК Bos taurus состоит из 22404 п.о.