2. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНЫХ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ПУПОВИНЫ ПЛОДА

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам получения из пуповины Вартонова студня, кордовой крови, пуповинных вен и артерий и пуповинной эмбриональной оболочки для будущих биоконтейнеров, для адресной доставки лекарств при лечении коров с болезнями половых органов после патологических родов и болезней новорожденных телят с диареей.

Известен способ получения ядросодержащих клеток из пуповинной крови. Суть этого способа заключается в заборе пуповинной крови в последующем выделении из крови ядросодержащих клеток, в последующем их консервировании. Недостатком этого способа является трудоемкость и длительность получения и переработки пуповинной крови перед криоконсервацией и после размораживания.

Известен способ получения трасплантанта в отоларингологии, где при создании типопластического материала получают и используют Вартонов студень. В способе резицируют участок пуповины плода, отжимают от кровяных сгустков из пуповинной вены и артерии. После продольного рассечения пуповины и отделения Вартонов студень и его укладывают на капроновую сетку, такая прозрачная пленка, толщиной 0,5 мл, накладывается на рану .

Недостатком этого способа является то, что при заготовке, Вартонового студня, его укладывают отдельными тяжами на капроновую сетку, подвергая ультрафиолетовому воздействию и орошают 1% раствором диоксида. Что снижает качество получаемого эмбрионального материала. В качестве ближайшего аналога принят способ получения эмбриобластоподобных клеток из пупочного канатика новорожденного . Способ заключается в том, что фибробластоподобные клетки получают из пупочного канатика новорожденного ребенка, когда фрагмент пупочного канатика подвергают воздействию коллагеназы -1 и коллагеназы - 4 в соответствии 1:1 в пропорции гомогената к раствору 1:5. Для получения природных лечебных веществ авторы используют ферментативные воздействия создаваемые химическим способом,

что уменьшает лечебные качества получаемых вытяжек меняя структуру плацентарных ферментов снижают дифференциальные свойства природно-эмбриональных клеток.

Задачей изобретения является создание способа получения из пуповины плода-теленка в возрасте первой половины внутриутробного развития не только кордовой крови но и Вартонового студня, пуповинных вен и артерии как нанотруочатых контейнеров, эмбрионально-плодную пористую оболочку пуповины, позволяющею заготовить и сохранить для успешной трансплантации максимально возможного количества стволовых клеток, и наноферментативных плацентарных фракций, повысить надежность и гарантию сохранения их жизнеспособности при адресной доставке лекарства к больному органу.

Целесообразность применения стволовых клеток, кордовой крови и ферментативных препаратов фетоплацентарного комплекса предназначены для лечения коров с болезнямиполовых органов после патологических родов. Высокий пролиферативный потенциал стволовых клеток, содержание ростовых факторов в препаратах стимулирующих деление клеток и бактерицидность делают их уникальными и незаменимыми в лечении животных.

Применение биологических препаратов включает механизмы физиологической регенерации и воспалительной пролиферации в области ожоговых и колото-резанных ран молочной железы у коров. Препараты изготовленные нами в жидкой и мазевой форме в которых имеется от 10% до 30% фракций пуповинной крови или Вартонового студня стимулируют пролифирацию клеток гранулезы и фибробластов. Наличие стволовых клеток в биоконтейнерах из пуповинных вен или артерий, а так же в пуповинной амниохориальной оболочке, введенных в больной организм проявляют миграцию и пролифирацию в тканях воспалительных процессов в половых органах коровы или в желудочнокишечном тракте новорожденных телят.

В пуповине плодов-телят находящихся в матке у стельной коровы в первой половине беременности сконцентрировано большое количество недифференцированных стволовых клеток нанорегуляторного характера ферментативных препаратов эффективно выполняющих лечебную роль.

Способ получения лечебных препаратов из пуповины предлагаемый нами включает в себя проведение ампутации пуповины в области пупочного кольца и на границе амниально-хориальной части детской плаценты,вакуумированием производят забор пуповинной крови из пуповинных вен и артерий, фиксируя перевязывают биологической нитью (кетгут) конци ампутированной пуповины, проводят сепарирование крови, отделяют эритроциты, нанофильтрируют плазменную и лейкоцитарную фракции, помещают пуповину в тепловую камеру, проводят продольное рассечение ампутированной пуповины для свободного стекания расплавленного Вартонового студня, извлекают пуповинные вены, артерии, пуповинную оболочку проводят их криоконсервацию.

Предлагаемый способ получения лечебных препаратов из пуповины плода выполняется в следующей последовательности:

1. Ампутируют пуповину в области пупочного кольца и на границе амнионо-хориальной части детской плаценты у плодовтелят в первую половину внутриутробного развития;

2. Делают забор крови из пупочных вен и артерий вакуумированием;

3. Фиксируют перевязыванием биологической нитью (кетгут) концы пуповины;

4. Сепарируют пуповинную кровь, отделяют эритроцитарную фракцию, фракцию с плазмой и ядросодержащими клетками нейтрофильной группы пропускают через нанофильтр от 20 до 100 нм;

5. Ампутированную пуповину дезинфицируют кварцеванием в течении 20 минут;

6. Помещают пуповину в тепловую (35-40°С)камеру, подвешивая ее в изогнутом состоянии за перевязанные концы;

7. Делают продольное рассечение стенки пуповины, фиксируя ее разрезом вниз для создания свободного стекания , расплавленного при температуре 40°СВартонового студня в емкость;

8. Извлекают пуповинную оболочку имеющую пористые эндотелиальные рыхлые стенки, и ее фиксируют 0,9% раствором хлористого натрия; 9. Извлекают пуповинные артерии и вены их фиксируют в 0,9% растворе хлористого натрия;