8. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЛАСТОЦИСТ ОТ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ
Способ относится к ветеринарии и может быть использован при извлечении бластоцист для получения гетерогенных бластомерных стволовых клеток при лечении коров и овец с гинекологическими болезнями.
Известен способ получения бластоцист, он заключается в том, что у коров доноров на пятый день после оплодотворения вымывали из матки с помощью двухканального катетера жидкостью 199.
Недостатком этого способа является его трудоёмкость и при введении вымывного катетера на 5-6-й день в канал шейки матки коровам возникает кровотечение в результате травмирования поперечных складок. Извлечение зигот вымыванием приходится производить несколько раз и зиготы зачастую собираются не только с жидкостью 199, но и со сгустками крови, что невозможно отделить даже фильтрацией.
Известен так же способ получения зигот, включающий взятие фолликулярных овоцитов из графового пузырька яичника. Для созревания их помещают в среду Хэнкса (с добавлением плодовой сыворотки крови, углекислого натрия, антибиотиков и фильтрация через фильтр). Полученные яйцеклетки подвергали оплодотворению, запуская к ним сперматозоиды через 20-24 часа, после этого происходило оплодотворение.
Недостатком этого способа является то, что миллиопоровые фильтры не всегда позволяют проводить очистку вымытого содержимого из матки от эритроцитов эпителиальных клеток, от вытекающей лициносодержащей слизи, поэтому только удается отмыть только до 30% полноценных яйцеклеток обладающих оплодотворяющей способностью. Известен так же способ и принят нами как прототип, когда производится у плодов взятие крови со стволовыми клетками из пуповины, предварительно фиксируя её пинцетом собирая её в емкость (пенициллиновый флакон).Недостатком этого способа является трудоёмкость выполнения , процедур, имеется возможность смешивания крови со слизью “Урахуса” с амниотической, аллантоизной жидкостями. Пинцет, фиксирующий пуповинные сосуды, имеющий плоские бранши не всегда равномерно при фиксации сосудов пуповины 39
регулирует передавливая поток крови, что приводит к травмированию пуповины и не равномерному вытеканию крови из артериальных и венозных сосудов.
Задачей на решение которой направлено заявленное изобретение является упрощение технологии получения бластоцист (бластомерных стволовых клеток) от дождевых червей для дальнейшей их криоконсервации и использовании при лечении животных гетерогенными стволовыми клетками.
Поставленная цель достигается тем, что в способе получения бластоцист наполненных бластомерными стволовыми клетками у дождевых червей из полового пояска с учетом того, что дождевые черви гермафродиты, поэтому оплодотворение яйцеклеток и образование бластоцист и зигот создается в течение нескольких часов и выход происходит в области полового пояска. Поэтому плоскими браншами пинцета надавливание на кальцеобразный половой пузырек приводит к раздавливанию, травмированию и гибели бластоцист и травмировавшего поверхности тела червей вызывая стрессовые факторы, что останавливает спермогенез, овогенез, оплодотворение. Поэтому бластоцисты приходится получать через 2-3 мин, а через 10 минут. И получение бластоцист производится путем легкого надавливания полукруглой . сетчатой формы браншами пинцета по всей окружности полового пояска. Легкие сдавливания тела дождевого червя в области полового пояска не создают стрессовых факторов и травмирования потому что бранши пинцета полукруглой сетчатой формы. В группе было собрано вакуумированием в емкость на 70% больше чем в контрольной группе испытуемых способов.
Заключение
Способ получения бластоцист от дождевых червей, путем предварительного фиксирования пинцетом полового органа у животного, последующим извлечением жидкости с наличием бластоцист отличающийся тем, что взятие бластоцист выполняется массажированием полового пояска червей полукруглыми сетчатыми брашнами пинцета, на котором зафиксирована присоска с градуированной емкостью для сбора бластоцист, выполненная из криоустойчивого светопроводного материала пригодная для длительного хранения бластоцист в жидком азоте (-196°С).
9. БИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТЕЙНЕР И ЕГО ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЖИВОТНЫМ
Биологический контейнер и его способ трансплантации животным относится к ветеринарии в частности к ветеринарному акушерству и гинекологии и используется для лечения коров с послеродовыми заболеваниями половых органов.
Известен способ использования наноносителей для направленной доставки лекарств в сосудистой системе когда используют для адресной доставки лекарств в митохондрии «Молекулыэлектровозы» высокоэффективный антиоксидант в соединении его с проникающим катионом. Синтез пластохинина и катиона родамина благодаря препарату введенного в организм больного дает возможность восстанавливать дыхательный процесс в легочной системе активируя окислительные процессы на внешней и внутренней мембранах митохондрий.
Недостатком этого способа является то, что для транспортировки лекарств к больному органу, патологическим клеткам доставляется химического состава лекарственные вещества, а не природного эмбрионального происхождения вещества. Эти вещества не имеют в наличии стволовых гемапотических клеток, ферментов, гормонов предназначенных для клеточной терапии.
Известен бйблогический контейнер для лечения сенильноймакулодистрофии сетчатки глаза , где к заднемуполюсуглазного яблока имплантируется биоконтейнер состоящий из отрезка сосуда донорской пуповины заложенной мелкодисперсным лиофилизированным порошком из ксеноселезенки. Но предварительно биоконтейнер консервируется в 0,2% спиртовом растворе тимола содержащего хлорид натрия.
Сущность предлагаемого изобретения состоит в том, что биологический контейнер состоит из отрезка пуповины наполненной Вартоновым студнем и фракцией пуповинной крови введенной вместо извлеченных пуповинных вен и артерий. Отрезок пуповины берут от плодов-телят, в возрасте первой половины внутриутробного развития, передвнесением в отрезок пуповинной фракции кордовой крови и ее сепарируют удаляя эритроциты, а фракцию и лейкоциты пропускают через нанофильтры. Отрезок пуповины наполнены ферментативными нанопродуктами,
41
