7. CПOCOБ ПОЛУЧЕНИЯ КРОВИ С НАЛИЧИЕМ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ И СТРОМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ОТ ПЛОДОВ ТЕЛЯТ

Изобретение относится к области ветеринарной медицины а именно к клеточной технологии в ветеринарной медицине.

Известен способ взятия крови у кроликов, где кровь берут при помощи шприца из ярёмной вены или из сердца путем прокола его иглой или острием скальпеля .

Однако этот способ непригоден для взятия крови у новорожденных, или плодов чтобы набрать кровь имеющей в наличие бактерицидные ферменты, стволовые стромальные клетки.

Взятие крови из ушной вены кролика иглой осложняется малой скоростью тока крови т.к. периодически наступает спадание стенок кровеносных сосудов капилляров приходится в несколько приемов массажировать ушную раковину, получив заполнение сосудов кровью производить один за другим сбор крови в шприц и несколько раз прокалывать кровебрательной иглой стенку кровеносных сосудов ушной раковины кролика. Так же известен способ взятия крови у нутрий, когда производят фиксацию животного, нагревают конечности в горячей воде до 50” (и вскрывают одну из конечностей там, где проходят кровеносные сосуды для взятия крови. Берут кровь в пробирку с 5 %-ным раствором цитрата натрия в соотношении 1:10.

Недостатком этого способа является то, что этот способ хотя и является без игольным и не наблюдается спазм стенок кровеносных сосудов, но периодический подогрев конечностей, отрезание когтей с захватом мягкой ткани задней лапы создает стрессовые факторы болевого характера. Открытая связь с окружающей средой при взятии крови у нутрий не обеспечивает ее стерильность. При снижении температуры при подогреве , конечностей поток крови уменьшается или прекращается, поэтому приходится брать кровь в малых дозах и в несколько приемов.

В качестве ближайшего аналога прототипа нами принят способ получения ядросодержащих клеток из пуповины характеризирующийся тем, что ядросодержащие клетки собирают с пуповинной кровью, которую собирают в два этапа, в непрерывном режиме путем эксфузии из дистального отдела пупочной вены с

последующим внесением антикоагулянта, а оставшуюся кровь собирают путем перфузии. Сбор крови производят в два контейнера поочередно перемешивают, отделяют супернатант, цетрифугируют при 2000 об/мин, добавляют 10-12% диметил сульфаксид в полиглюкине с последующим замораживанием и дальнейшем использованием с лечебной целью.

Однако этот известный способ непригоден для получения .плодной крови богатой ядросодержащим и клетками. Недостатком этого способа является получение малого объема пуповинной крови. Это связано с изменением давления в грудной и брюшной полепи плода, когда кровеносные сосуды запустевают, поэтому приходится собрать кровь из пуповины в несколько приемов используя экфузию, перфузию получая пуповинную кровь малыми дозами используя для сбора крови несколько контейнеров с добавлением антикоагулянта. Сам процесс сбора крови трудоемок.

Техническим решением задачи является повышение эффективности взятия крови у плодов крупного рогатого скота за Счет аннулирования процесса спазмирования стенок кровеносных сосудов и свертывания крови кровеносных сосудах пуповины. Поставленная задача достигается тем, что способ взятия крови у 4-5 месячных плодов-телят взятых от сдельных коров подвергнутых убою в результате объявления скотоферм, колхозов банкротами.

При выполнении способа процедуры выполняли в следующем порядке:

• -извлечение беременной матки после нутровки стельных коров;

• освобождение плода от детской и материнской плацент;

• -взятие крови из ярёмной вены плода;

• добавление к крови антиоксиданта, отстаивание,

• центрифугирование отличающийся тем, что (освобождение плода от детской и материнской плацент производят без и ампутации пуповины);

• кровь берут из ярёмной вены у 4-5 месячных плодов телят; - вакуумное пространство в грудной и брюшной полости

• плода препятствующие свободному вытеканию крови (гидродинамика) ликвидируют методом прокола их троакаром;

Проводимые манипуляции в предложенном способе приводят к максимальному получению количеству крови необходимого

для сбора крови а так же не повышает риск микробного заражения. Процесс сбора крови происходит без контакта с матерью быстро, не предоставляет никакого риска для мясной продукции убойных туш коров поступивших на убой с убойного цеха в цех переработки в холодильные камеры, потребителю.

Поголовье коров представлены убою в результате обанкротившегося хозяйства должно быть перед убоем подвергнуто диспансеризации по заразным и незаразным болезням. Способ выполняется следующим образом:

1. Сбор крови проводят в прокварцованном помещении.

2. Беременную матку с плодом кладут на металлический стол, дезинфицируют обливая раствором марганцевого кислого калия 1:1000.

3. Через продольный разрез стенки матки большого рога матки освобождают плод от детской и материнской плацент, от амниотической и аллантоисной жидкостей не травмируя пупочное кольцо, не ампутируя пуповину добиваясь свободной видимости головы, шеи, туловища плода.

4. Проводят осмотр и пальпацию яремного жлоба, прощупывая яремную вену в дальнейшем у плода находящегося в лежачем положении. Наружная яремная вена на шее плода расположена под кожей в яремном желобе образованном плечеголовной и грудоголовной мышцами. .

5. Одним движением руки вводят изогнутую со шлангом (№ 133) иглу в набухшую плодной кровью яремную вену лежащую в яремном желобе шеи плода. Для сбора крови из яремной вены у плода используют специальные стеклянные емкости или закрытые трансфузионные системы, содержащие антикоагулянт типа «Гемакон», «Baxter» оснащенные стерильной дренажной иглой, имеющей изгиб в 130°, соответствующий топографии вогнутости мышц яремного жолоба изгибаем до 130° что исключает препятствие для вытекания крови у плода находящегося в лежачем положении.

6. Троакаром оставляя гильзу удаляя стилет прокалывают стенку брюшной (возле диафрагмы), грудной полости ликвидируют вакуумное состояние, что способствует безпрепятственой транссудации крови по сосудам, через иглу введенную в яремную вену кровь вытекает в емкость с антиоксидантом.