Наличие вакуума в брюшной и грудной полости плода приводит к запустению кровеносных сосудов пуповины (по законам физиологии), поэтому медикам удается брать малые объемы пуповинной крови у только, что родившихся детей.
Наиболее обильное образование форменных элементов, ядросодержащих клеток, гемопоэтических и стромальных стволовых клеток, ферментов у плодов в крови достигает в середине беременности, а к концу внутриутробного развития (плодов уменьшается. Поэтом) наиболее рациональным является то, что кровь от плодов-телят необходимо собирать в 4-5 месячном возрасте в внутриутробного развития.
Практическое применение
Важнейшей характеристикой плодной крови является наличие в ней количеств ядросодержащих клеток. Образцы плодной крови мы подвергали методом подсчета лейкоцитов в формуле, подсчитывая на Световом микроскопе при стандартной окраске мазков по Романовскому. Исследования показали, что в пробах крови у плодов-телят имеется от 1-0,5x109 до 2x109 ядросодержащих клеток: лейкоцитов 7,24x109/л то 25,3x109/л, тромбоцитов (130x109/л до 410,1х109).
В последующем проводят фракционирование вытяжек для выделения ядросодержащих клеток из плодной крови центрифугированием супернатанта при 2000 об/мин, (20мин). Из фракционированной плодной крови после центрифугирования изготовили 10% мазь. Ежедневно эту мазь в течении 7 дней по 100 мл. вводили в канал шейки матки коровам с послеродовым гнойным цервицитом (Таблица 1).
Таблица 1 – Лечение послеродовых гнойных цервицитов у коров
| Способ лечения | Больных коров (всего) | Из них здоровело число | вы- % | 5 | Сроки выздоровления (дни) 10 | 15 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 10% мазь из фракционной плодовой крови после центрифугирования | 12 | 10 | 83,3 | 12 | 8 | 2/16,7% |
После использования фракционной мази из плодовой крови (таблица 1) в форме 10% мази коровам введенной в канал шейки матки выздоровление наступило на 10 день 83.3% коров, раннее болевших воспалением шейки матки, на 28,8% выздоровело коров больше, чем после лечения коров в контрольной группе, которым в канал шейки матки вводили в течение 7 дней по 5-6 г фуразолидоновых пенообразующих палочек. Сроки лечения опытной группы коров были на 6-10 дней меньше чем в контрольной группе коров.
Заключение
Изобретение относится к ветеринарной медицине к области клеточной терапии и может быть использовано при лечении коров с бесплодием, и новорождённых телят. Сущность изобретения состоит в том, что у 4-5 месячных плодов-телят извлеченных из матки стельных коров берётся кровь не из пуповины, а из ярёмной вены, для гидродинамического потока крови по кровеносным сосудам плода, троакаром ликвидируется в брюшной и грудной полости вакуум, что способствует свободному вытеканию плодной крови богатой гемопоэтическими и стромальными стволовыми клетками, ферментами, ядросодержащим и форменными элементами крови добавляют к крови антиоксидант, отстаивают, центрифугируют.
Способ получения гемопоэтмческих и стромальных стволовых клеток от плодов-телят, заключающийся в том, что извлекают беременную матку после нутровки стельных коров, освобождают плод от детской и материнской Плацент без травмирования и ампутации пуповины, берут кровь из яремной вены у 4-5 месячных плодов телят, при этом вакуумное пространство в грудной и брюшной полости плода препятствующие свободному вытеканию крови (гидродинамика) ликвидируют методом прокола их троакаром, добавляют к крови антиоксидант, отстаивают, центрифугируют.
8. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЛАСТОЦИСТ ОТ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ
Способ относится к ветеринарии и может быть использован при извлечении бластоцист для получения гетерогенных бластомерных стволовых клеток при лечении коров и овец с гинекологическими болезнями.
Известен способ получения бластоцист, он заключается в том, что у коров доноров на пятый день после оплодотворения вымывали из матки с помощью двухканального катетера жидкостью 199.
Недостатком этого способа является его трудоёмкость и при введении вымывного катетера на 5-6-й день в канал шейки матки коровам возникает кровотечение в результате травмирования поперечных складок. Извлечение зигот вымыванием приходится производить несколько раз и зиготы зачастую собираются не только с жидкостью 199, но и со сгустками крови, что невозможно отделить даже фильтрацией.
Известен так же способ получения зигот, включающий взятие фолликулярных овоцитов из графового пузырька яичника. Для созревания их помещают в среду Хэнкса (с добавлением плодовой сыворотки крови, углекислого натрия, антибиотиков и фильтрация через фильтр). Полученные яйцеклетки подвергали оплодотворению, запуская к ним сперматозоиды через 20-24 часа, после этого происходило оплодотворение.
Недостатком этого способа является то, что миллиопоровые фильтры не всегда позволяют проводить очистку вымытого содержимого из матки от эритроцитов эпителиальных клеток, от вытекающей лициносодержащей слизи, поэтому только удается отмыть только до 30% полноценных яйцеклеток обладающих оплодотворяющей способностью. Известен так же способ и принят нами как прототип, когда производится у плодов взятие крови со стволовыми клетками из пуповины, предварительно фиксируя её пинцетом собирая её в емкость (пенициллиновый флакон).Недостатком этого способа является трудоёмкость выполнения , процедур, имеется возможность смешивания крови со слизью “Урахуса” с амниотической, аллантоизной жидкостями. Пинцет, фиксирующий пуповинные сосуды, имеющий плоские бранши не всегда равномерно при фиксации сосудов пуповины 39
