г.
випиентамощьюПервоеспециальных(животное,сообщениеинструментов.овынашивающеепересадке яйцеклеток› эмбрион}млекопи-с потающих относится к концу XIX в., когда Хип произвел обмен зиготами между предварительно ‘спаренными самками кролика и обнаружил, что два потомка по внешнему виду больше напоминали исходное животное— донора, чем репилиеита. Расцвет техники трансплаитаHH приходится на последние 25 лет, когда пересадкой яйцеклеток и эмбрионов воспользовались для изучения фупдаментальных вопросов физиологии воспроизведевия, например оплодотворения в пробирке, а также для совершенствования селекционных программ. Наблюдается постепенный перевод технологии трансплантации эмбрионов на промышленную основу. Физиологические и технические условия трансплантации. Трансплантация эмбрионов была успешно осуцествлена у большниства лабораторных животных, приматов и у крупных сельскохозяйствеиных животных, однако наибольшее практическое применение эта операция получила в скотоводстве, Число пригодных для пересадки эмбрионов увеличивают с помощью суперовуляцин (множественной овуляции), что достигается птъекцией 2000—3000 МЕ СЖК примерно за 4 дня до спаривания. Искусственное осеменение донора проводят увеличениыми дозами спермиев пепосредственио перед овуляцией: или проводят двойное осеменение. Удобнее всего извлекать у животиого-донора эмбрионы после того, как оми опустятся в матку, то есть через 3 дия после овуляции, что особенно важно при вехирургическом способе извлечения эмбрионов. Сейчас, особенно за рубежом, применяют хирургнзеский метод извлечения эмбрионов путем лаларотомии сбоку живота или по белой линии (кесарево сечение). Лапаротомию выполняют под общим наркозом, половой тракт вскрывают, а затем промывают матку физнологическим солевым раствором; вымытые эмбрисны собирают в стеклянные чашки Петри. Среду вводят, в полость матки с помощью шприца и иглы, аккуратно продвигая жидкость вдоль рога матки и слегка сжимая ero пальцами. Из полости матки жидкость выводят наружу с помощью резиновой или стеклянной канюли. Донорных животных обычно использую“ не более 3 раз, после чего возвращают в стадо для воспроизводства. |
В случае применения нехирургического метода (в СССР чаще им пользуются) эмбрионы извлекают из верхней доли рогов матки приблизительно на 6—8-й день после овуляции. `В большинстве современных методик рекомендуется введение и отсасывание через шейку матки специальной среды. Этот прием обычно проводят без наркоза, фиксируя корову (положение стоя, причем желательно, чтобы задние конечности находились чуть выше передних). В целях предупреждения дефекации и спятия мышечного напряжения обычно назначают эпндуральную анестезию. Инструментарий для промывки состоит из трехходового катетера Фоли (или советских модификаций) н надувного баллончика-манжеты, с помощью которого перед вливанием жидкости изолируется задний конец рога матки. Одина трубка катетера ведет в падувную манжету, другая обеспенивает прохождение вводимой среды в рог матки у конца катетера, а третья позволяет слить промывную жидкость в стеклянную посуду-коллектор. Перед введением в катетер вставляют специальный жесткий сердечник (мандрен), чтобы облегчить прохождение цервикального канала и проникцовение в избранный рог матки. Полное извлечение эм брионов достигается при обильном (до 500 мл раствора, нагретого до 37°) промывании содержимого матки с одновременным массажем через прямую кишку рога, заполненного физиологической средой. У опытных специалистов при неоднократных промывках получаются хорошие результаты, причем возможность травмирования донора сводится в минимуму. После того, ках эмбрионы собраны, необходимо отыскать их среди ма точного содержимого на дне коллектора; следует отметить, что эта процедура довольно трудоемкая, Следует соблюдать осторожность, чтобы пе допускать бактериального загрязнения и переохлаждения. Под световым микроскопом находят эмбрионы, соблюдая при этом необходимые асептические условия. Морфологически полноценные эмбрионы, отобранные для трансплантации, можно хранить в никубаторе (35— 37°) или при температуре 18—20? в течение нескольких часов в подходящей среде для культивирования, не допуская температурного шока, резких колебаний рН и испарения. В том случае, если эмбрионы уже собраны, а число подходящих рецепиентов педостаточно, прибе-
18!
гают к длительному хранению зигот либо в яйцеводах синхронизированных (псевдобеременных) кроликов, либов замороженном состояпни при —196° в жидком азоте, Пересадку эмбриопов осуществляют двумя методами: хирургическим и нехирургическим. Хирургический р метод (чаще применяется за границей} включает лапаротомию по белой линии живота под общим наркозом или реже боковой разрез под местной анестезней с лоследующим обнажением полового тракта и введением эмбриона в полость матки через неболыной прокол в ее стенке. Непосредственно перед трансплантацией с помощью шприца для подкожных инъекций в пастеровскую пипетку, в кончике которой имеется небольшое количество срелы для культивирования, засасывается подходящий эмбрион; все 9TH манипуляции тщательно контролируются под микроскопом. Проведение трансплантации хурургическям путем — трудоемкий процесс, для выполиения которого требуется опытная бригада ветврачей (как минимум 2 хирурга, анестезиолог}, а также рабочий по уходу за животными; однако результаты, судя по стельности реципиентов после пересадки им эмбрионов, обычно бывают хорошими и варьируют в пределах от 52 до 90%. При нехирургическом методе пересадки (широко применяется в СССР) инструмент для искусственного осемепепия, канюлю, пипетку вводят через канал шейки матки в переднюю треть рога матки и вводят эмбрион со средой, то есть эта процедура схожа с искусственным осеменением и ее могут выполнить опытные техники-осеменаторы после специальной подготовки. У овец успешную трансилантацию хирургическим способом осуществляли BO все периоды развития, вплоть до стадии 12—13-дневного удлиненного трофобласта, причем даже на поздних стадиях развития степень приживления эмбрионов была высокой (до 40% ). У свиней получен положительный результат только при пересадке 6б—8-дневных блестоцист, попытка пересадить удлиненный трофоблест па 9-й день развития оказалась безуспешной. Нехирургическая пересадка 8—16-клеточпых эмбрионов в матку свиней заканчивалась супоросностью, хотя эффективность в опытах была небольшой. q Проведение канюли через длинный цервнкальный ка— нал свиньи остается трудной и очепь ответственной опеЯ
— Я
