В случае применения нехирургического метода (в СССР чаще им пользуются) эмбрионы извлекают из верхней доли рогов матки приблизительно на 6—8-й день после овуляции. `В большинстве современных методик рекомендуется введение и отсасывание через шейку матки специальной среды. Этот прием обычно проводят без наркоза, фиксируя корову (положение стоя, причем желательно, чтобы задние конечности находились чуть выше передних). В целях предупреждения дефекации и спятия мышечного напряжения обычно назначают эпндуральную анестезию. Инструментарий для промывки состоит из трехходового катетера Фоли (или советских модификаций) н надувного баллончика-манжеты, с помощью которого перед вливанием жидкости изолируется задний конец рога матки. Одина трубка катетера ведет в падувную манжету, другая обеспенивает прохождение вводимой среды в рог матки у конца катетера, а третья позволяет слить промывную жидкость в стеклянную посуду-коллектор. Перед введением в катетер вставляют специальный жесткий сердечник (мандрен), чтобы облегчить прохождение цервикального канала и проникцовение в избранный рог матки. Полное извлечение эм брионов достигается при обильном (до 500 мл раствора, нагретого до 37°) промывании содержимого матки с одновременным массажем через прямую кишку рога, заполненного физиологической средой. У опытных специалистов при неоднократных промывках получаются хорошие результаты, причем возможность травмирования донора сводится в минимуму. После того, ках эмбрионы собраны, необходимо отыскать их среди ма точного содержимого на дне коллектора; следует отметить, что эта процедура довольно трудоемкая, Следует соблюдать осторожность, чтобы пе допускать бактериального загрязнения и переохлаждения. Под световым микроскопом находят эмбрионы, соблюдая при этом необходимые асептические условия. Морфологически полноценные эмбрионы, отобранные для трансплантации, можно хранить в никубаторе (35— 37°) или при температуре 18—20? в течение нескольких часов в подходящей среде для культивирования, не допуская температурного шока, резких колебаний рН и испарения. В том случае, если эмбрионы уже собраны, а число подходящих рецепиентов педостаточно, прибе-
18!
гают к длительному хранению зигот либо в яйцеводах синхронизированных (псевдобеременных) кроликов, либов замороженном состояпни при —196° в жидком азоте, Пересадку эмбриопов осуществляют двумя методами: хирургическим и нехирургическим. Хирургический р метод (чаще применяется за границей} включает лапаротомию по белой линии живота под общим наркозом или реже боковой разрез под местной анестезней с лоследующим обнажением полового тракта и введением эмбриона в полость матки через неболыной прокол в ее стенке. Непосредственно перед трансплантацией с помощью шприца для подкожных инъекций в пастеровскую пипетку, в кончике которой имеется небольшое количество срелы для культивирования, засасывается подходящий эмбрион; все 9TH манипуляции тщательно контролируются под микроскопом. Проведение трансплантации хурургическям путем — трудоемкий процесс, для выполиения которого требуется опытная бригада ветврачей (как минимум 2 хирурга, анестезиолог}, а также рабочий по уходу за животными; однако результаты, судя по стельности реципиентов после пересадки им эмбрионов, обычно бывают хорошими и варьируют в пределах от 52 до 90%. При нехирургическом методе пересадки (широко применяется в СССР) инструмент для искусственного осемепепия, канюлю, пипетку вводят через канал шейки матки в переднюю треть рога матки и вводят эмбрион со средой, то есть эта процедура схожа с искусственным осеменением и ее могут выполнить опытные техники-осеменаторы после специальной подготовки. У овец успешную трансилантацию хирургическим способом осуществляли BO все периоды развития, вплоть до стадии 12—13-дневного удлиненного трофобласта, причем даже на поздних стадиях развития степень приживления эмбрионов была высокой (до 40% ). У свиней получен положительный результат только при пересадке 6б—8-дневных блестоцист, попытка пересадить удлиненный трофоблест па 9-й день развития оказалась безуспешной. Нехирургическая пересадка 8—16-клеточпых эмбрионов в матку свиней заканчивалась супоросностью, хотя эффективность в опытах была небольшой. q Проведение канюли через длинный цервнкальный ка— нал свиньи остается трудной и очепь ответственной опеЯ
— Я
patel с постоянной опасностыю прободения стенкн полового тракта. Применяется в экспериментах трансплантация эмбPHOHOB и у кобыл. Трансплантация в перспективе может применяться для решения следующих задач: полнее использовать генотип выдающихся самок, получая от одного донора значительно больше потомков, чем это возможно при естественном восироизводстве. В сочетании с искусственным осемепением трансплантация обеспечивает полный контроль за генотипом эмбрнона. Таким образом, от высокоудойной рекордистки или от коровы мясной породы, отличающейся высокой CKO роспелостью, можно получить целую серию выдающихся дочерей. Применяя иехирургический способ извлечения эмбрионов, одно лопорское животное можно нспользовать 3 | раза в гол, тем самым резко увеличивая его естественную репродуктивную способность; в последине годы трансплантацию широко примеияот для быстрого увеличения численности редких, «экзотических» нли выдающихся в племенном отношении пород. Так поступили с некоторыми континентальными свропейскимн породами, например симментальской, лимузинами, шароле. Хорошие результаты дал этот метод при экспорте европейских пород в Северную Амернку, Японию и в Австралию. Действительно, экспорт берсменных рецилиентных животиых хорошо удовлетворя ег жестким долгосрочным карантинным требованиям стран-импортеров; быстрое размножение животных спенифических ге| вотвиов путем суперовулянни и трансплантации позво | ляетлее высокийускоритьэффектселекционныйселекиии.процесс,В то времяобеспечиваетпока физно-Goлоги еще осмысливают факторы, обеспечивающие ус пешное применение методов трансилантации, генетики сравнительно педавно уже опубликовали математичес| кое обоснование возможных преимуществ в этой области. Рано или поздно селекционные программы, основанные на применении трансялантации эмбрионов, приведут к созданию элитных стад, что положительно отразится на племенных и продуктивных качествах животных в целом по стране; интенсивной эксплуатации воспроизводительного потенциала крупного рогатого скота будет способство-
183
