- В целях страховки от случайных факторов рекомендуем готовить на одного потенциального донора 2-3 потенциальных рециниента.
В случае, если донор осеменен правильно и своевременно и степень синхронности половых функций донора и реципиента находится в пределах от + 24 до -72 часов, задача по подготовке кобыл к пересадкам считается выполненной, и можно рассчитывать на положительный результат. Извлечение и пересадку зародышей производят через 8-8,5 суток после овуляции у кобыль-донора. |
|
4.5 ПОДГОТОВКА ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ, ОБОРУДОВАНИЯ И ПОМЕЩЕНИЙ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ Работа по извлечению и пересадке эмбрионов требует строгого соблюдения мер асептики и санитарноветеринарных правил. Рекомендуется использование одноразовых инструментов и посуды.
Используемую лабораторную посуду, катетеры многоразового применения моют в растворе нейтрального моющего средства, затем ополаскивают проточной, дистиллированной и бидистиллированной водой. Стеклянную посуду (колбы, воронки, пипетки, чашки) высушивают, заворачивают в пергаментную бумагу и стерилизуют сухим жаромBTe- чение 2-х часов при температуре 150°С или 3-х часов - при температуре 140°С. В таком же режиме обеззараживают помещенный в стеклянную пробирку металлический катетер для пересадки эмбрионов, пипетки для переноса эмбрионов. Резиновый катетер для извлечения эмбрионов, шприцы и иглы кипятят в отдельных стерилизаторах в течение 40 минут, воду сливают, не открывая крышки, и охлаждают до комнатной температуры.
При наличии автоклава, все термически устойчивое оборудование, спецодежду и т.п. можно стерилизовать горячим паром в режиме 1,5 атм. в течение 30 минут.
Изделия из пластмассы, не выдерживающие тепловой стерилизации, моют, обеззараживают 70% этиловым спиртом, просушивают, выдерживают под УФ-облучением не менее 2 часов, упаковывают в стерильную бумагу и хранят в бактерицидной камере. Перед использованием инструментов в камере снова включают облучение на 2-3 часа. Полиэтиленовые перчатки и чехлы! одноразового пользования обрабатывают бактерицидными лампами в биокамерев течение2 часов. За сутки до намечаемой пересадки проводят влажную уборку и дезинфекцию помещений 3% раствором перекиси водорода (или «Глютекса»). Для приготовления дезинфицирующего раствора к 9 литрам воды добавляют 1 л 25-20% раствора перекиси и 50 г моющего средства. Для дезинфекции воздуха в помещении используют бактерицидные лампы, которые включают на 2-3 часа и выключают за 1 час до начала работ по трансплантации. При недостаточной мощности ультрафиолетового облучения (2 вт/мг) его продолжительность пропорционально увеличивают. В помещениях, где проводится работа с эмбрионами, должна поддерживаться температура 25-28°С и влажность воздуха 70-80%. Приборы и лабораторные столы протирают ватными тампонами, смоченнымив70° спирте. Флаконы с фосфатнобуферной средой Дюльбекко также обрабатывают спиртовыми тампонами, пробку и горлышко обжигают пламенем горелки. Спецодежду операторов стерилизуют в сушильном шкафу или автоклаве в стандартном режиме.
Для извлечения,4.6 ПРИГОТОВЛЕНИЕ непродолжительногоРАСТВОРОВхранения т vitro (вне организма) и пересадки эмбрионов лошадей применяют три раствора различного состава: = 1. Промывной раствор применяют для извлечения и не рионов продолжитеньногы хранения (до 1 часе) эмб
in vitro. На промывание матки одной кобылы-донора обычно расходуют 2-2,5 литра этого раствора. Расход раствора зависит от величины животного, из расчета 0,5 литра на 100 кг живой массы донора. Учитывается также половой статус животного (у выжеребившихся или много рожавших кобыл размер матки может быть больше, чем у молодых кобыл). Для целей вымывания применяется фосфатно-солевой буферный раствор Дюльбекко (ФБС), выпускаемый отечественными (НПП «Панэко») и зарубежными («Minitube», Германия) фирмами. Правила хранения и срок годности pac твора указаны на этикетке флаконов. Содержимое из стерильно откупоренных флаконов переливают в стеклянную колбу емкостью 2000 мл. 2. Ополаскивающий раствор используют для промывания матки кобылы-донора после извлечения эмбриона с целью подавления развития случайно занесенной в ее | полость микрофлоры. Готовят 2 литра 0,9% раствора | поваренной соли (NaCl) на основе дистиллированной | воды. Двукратно доводят его до закипания (не давая кипеть), охлаждают до температуры 36-37°С и затем | добавляют 20 мл 3%-ного раствора препарата «Полиген» (фирма «Мосагроген») из расчета 300 мкг/мл. 3. Пересадочный раствор представляет собой среду, обогащенную энергетическими источниками, поддерживающими эмбрион в жизнеспособном состоянии. Для этого используют ФБС Дюльбекко с добавлением 3-5% инактивированной фетальной сыворотки теленка или 5% бычьего сывороточного альбумина и антибиотиков (полиген в концентрации 300 мкг/мл). В этом раствореи переносят зародышив помещаютматку кобыл-рв п е ципиентов.ресалочный Готовятинструментраствор в заранее простерилизованном и закупоренном AOC ФвиНЬ, неее шприцем отбирают из флакона с ФБС Дюльбекко 10 мл раствора и закачивают в пенициллиновый флакон.
