Хранение спермы
Как правило, гранулы бывают трех видов: необлицованные малого объема (0,1-0,2 мл) с высокой концентрацией спермиев, необлицованные большого объема (0,5-1 мл) со средней концентрацией спермиев и облицованные в полимерную оболочку объемом 0,25 мл, хранимые в сосудах Дьюара, содержащих жидкий азот. Сосуды для хранения, используемые на фермах и комплексах – это большие термосы, которые периодически следует проверять на утечку и регулярно восполнять жидкий азот.
Замороженная сперма находится в состоянии анабиоза. Она должна содержаться в жидком азоте (при – 196°С). Хотя сперма остается замороженной, пока ее температура остается ниже 0°С, при повышении температуры до минус 100-73°С сперматозоиды повреждаются и их жизнеспособность существенно снижается. Не допускается преждевременное оттаивание спермы и повторное ее замораживание. Даже кратковременное повышение температуры до -125°С вредно отражается на качестве спермы. Контейнер с нужной спермой должен всегда находиться как можно ниже в горловине сосуда. Если по прошествии 10 секунд нужная туба не найдена или мешочек с гранулами семени не найден, необходимо опустить контейнер в сосуд на 10-15 секунд, чтобы предотвратить слишком большое возрастание температуры. Температура тубы, вынутой из рефрижераторного контейнера, возрастает от -196°С до критической температуры -100°С за 15-20 секунд и в гранулах начинается образование кристаллов льда (явление рекристаллизации), что ведет к повреждению сперматозоидов и снижению их активности.
Сосуд Дьюара представляет собой сосуд с двойными стенками. Пространство между стенками заполнено вакуумом, что придает сосуду прекрасную теплоизоляцию. Внутренний сосуд, содержащий жидкий азот, как бы подвешен на горловине внешнего сосуда. Полость внутреннего сосуда охлаждается при медленном и постоянном кипении жидкого азота, сопровождающимся переходом азота из жидкого в газообразное состояние. Плотно закрытый холодильный резервуар взрывоопасен, поэтому приемник сосуда Дьюара сконструирован таким образом, чтобы позволять выводить газооб-
разный азот наружу. Жидкий азот сам по себе не является взрывоопасным или токсичным веществом, однако может вызывать обморожения при прямом контакте с кожей. В зависимости от объема холодильный резервуар необходимо перезаправлять каждые 4-9 месяцев.
Сосуд Дьюара должен храниться в хорошо вентилируемых помещениях. Во избежание коррозии, помещение должно быть сухим, и близость воды или химических соединений абсолютно недопустима. Лучше всего сосуд Дьюара хранить на плоских, приподнятых деревянных поддонах, а не на цементном полу. Сосуд Дьюара должен находиться в таком месте, чтобы его можно было видеть каждый день. Намороженное утолщение вокруг горловины сосуда является индикатором того, что изоляция нарушена и происходит быстрое испарение жидкого азота. В таком случае необходимо использовать измерительный прут для определения уровня оставшегося в сосуде жидкого азота. Если в сосуде все еще имеется какое-то количество жидкого азота, то по всей вероятности образцы семени еще не пострадали и их необходимо переместить в новый резервуар с ненарушенной изоляцией. Если в сосуде не осталось жидкого азота, то может оказаться, что сперматозоиды уже мертвы, этого возможно избежать путем частых периодических проверок уровня жидкого азота и наличия намороженного утолщения на горловинах резервуаров. И, наконец, всегда необходимо помнить простую истину, что семя в резервуаре представляет собой капиталовложение и требует защиты, так как содержит в себе будущее всего стада.
Оттаивание спермы
Высокая скорость оттаивания важна для сохранения оплодотворяющей способности спермы. Любой замороженный материал оттаивает гораздо быстрее, если его поместить в воду вместо воздуха. Сперму нужно оттаивать в биотермостатах или водяной бане при температуре 38-40°С, в течение 30-40 секунд. При этом исключительно важно использовать точный термометр. Точность термометра должна регулярно проверяться. Если вода будет слишком теплой, существует реальная опасность гибели сперматозоидов. Обычно около 40 процентов сперматозоидов выживают после процедуры замораживания и оттаивания. Однако если гранула оттаивает на воздухе, а не в воде, доля выживших сперматозоидов может упасть ниже 30 процентов, поскольку оттаивание происходит слишком медленно.
Осеменение
Технология искусственного осеменения требует детального понимания строения полового тракта коровы и специального практического обучения. Специалист с высокой квалификацией будет очень внимательно следить за соблюдением высокого уровня гигиены на всем протяжении процедуры, чтобы максимально снизить возможность бактериального заражения. Неквалифицированный специалист скорее всего не сможет осеменить корову с первого раза. В то же время небрежное отношение к гигиене или нехватка опыта может легко привести к заражению или непоправимым повреждениям воспроизводительного тракта коровы [6].
Для осеменения коров и телок применяется цервикальный метод введения спермы, то есть в канал шейки матки. Существует три способа введения спермы в шейку матки: ректо-цервикальный, мано-цервикальный и визоцервикальный.
При осеменении ректо-цервикальным способом корове или телке сперму вводят в шейку матки с помощью стерильных одноразовых инструментов, фиксируя шейку матки рукой через прямую кишку. Очень важно минимально уменьшить движения, чтобы избежать попадания воздуха в ректальное отвер-
