МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ В КОРМАХ и ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОВОДСТВА
До последнего времени корма анализируют на содержание в них сухого вещества, переваримого протеица, сырой клетчатки, сырого жира, безазотистых экстрактивных веществ, золы и отдельно кальция и фосфора. В зеленых кормах иногда количественно определяют каротин. Такой апализ даст общее представление о питательных достоинствах кормов, по по нему нельзя судитьглавнымо биологическойобразом от его ценностиаминокислотногопротеина,состава.зависящегоТакой зоотехнический анализ корма, предназпачениого для взрослых жвачных животных, можно пока считаяь удовлетворительным, но для растущего молодняка, особенно свиней, лошадей, птицы, он совершенно недостаточен. Хорошо известно, что животные с простым желудком очень чувствительны к аминокислотному составу кормового белка, и, если пе хватает даже одной из десяти пезаменимых амипокислот, у них прекращается рост, снижается вес и продуктивность, они легко подвергаются различным заболеваниям. С развитием промышленных способов ведения свиноводства и птицеводства совершенно необходимо полностью обеспечивать эти виды животных амирокислотами, а следовательно, и знать аминокислотный состав рационов. ,
Конечно, в первую очередь производить комбикорма, сбалансированные по незаменимым аминокислотам, следует для свиней и птицы. Аминокислотный состав комбикормов надо определять в лабораториях комбикормовых заводов, при пользовапии таблицами возможна ошибка на 50%. Методы количественного определения аминокислот в кормах и продуктах животноводства за последнее время зпачительно усовершенствованы, и некоторые из них стали доступными для всех агрохимических и зооветеринариых лабораторий. Например, метод бумажной хроматографии прост, доступен и достаточно точен. Автоматы-анализаторы аминокислот пока необластныеagerymmbl длялаборатории сассовых лабораторий,и лабораториино многиекомби крупные азовПоэтомуможноцелесообразно ми оснащать,В брошюрератор изложитьбикормовыхсовременные методы аминокислотного анализа кормов с тем,
45
чтобы специалисты ознакомились с ними и изыскивали возможности для их применения.
Качественные методы дают возможность установить наличие в белках ряда амипокислот. Оспованы они на способности отдельных амипокислот взаимодействовать с определенными реактивами, в результате чего образуются новые вещества определенного цвета. По появлению цвета судят о присутствии той или иной аминокислоты в даниой пробе белка. При рассмотрении цветных реакций на белки были описаны некоторые реакции на аминокислоты. Так, например, появление желтого цвета при подогревании раствора белка с концентрированной азотной кислотой свидетельствует о наличии в молекуле белка тирозина, или фепилаланина, или обоих вместе. В молекуле этих аминокислот содержится циклическое ядро бензола, KOторое при реакции с азотной кислотой превращается в нитробензол (в случае тирозипа — в нитрофенол), имеющий желтую окраску. Эта реакция называется ксантопротеиповой. Там же описапы реакции, специфические на тирозин „(реакция Миллона) н на триптофан (реакция Адамкевича). Подобно белкам, все аминокислоты дают реакцию с нингидрином. Эта очень чувствительная реакция заключается в появлении сине-фиолетового окрашивания раствора аминокислот при добавлении капли раствора пиигидрица (0,05%-ный раствор ниигидрина в метнловом спирте). Количественные методы. Существует три вида методовческий,количественногохроматографическийопределенияи микробиологический.аминокислот— химиМик - робиологический метод требует специальных условий, многих дефицитных ингредиентов питательных сред, строгого культивирования ряда штаммов микробов ит. д. On труден для применения даже в хороших лабораториях, поэтому в брошюре описание его давать нецелесообразно. Химические методы используют для определения в белках только некоторых аминокислот, дающих при реакции окрашенные вещества. Так как интенсивность окраски обычно пропорциональна концентрации аминокислоты в пробе, то, сравнивая при помощи фотометра степень окраски испытуемого раствора с окраской стандартного раствора, определяют содержапие аминокисло-
46
ты в пробе, а затем путем пересчета — во всем исследуемом материале. Определение лизина. Лизин— важнейшая незаменимая аминокислота, обычно дефицитная в растительных рационах. Лизин не во всех кормах доступен оргапизму животных. Поэтому его чаще, чем другие незаменимые аминокислоты, определяют в кормах как в количественпиом отношении, так и по доступности его для животных.
Как известно, лизин имеет две аминогруппы— при первом и пятом углеролах от карбоксильной группы. 5 4 3 о 1 СН.— СН. --CH.—CH,.—CH —COOH | _ - - 7 ' , NH. NH, 7 . - Напомним, что первый углерод от карбоксила называется альфа-углеродом (a), а пятый — эпсилон-углеродом (&). Поэтому и аминогруппы в лизиие обозначаются: прин первом углеродном атоме’ а-группой, а при пятом — г‚аминогруппой. В белковой молекуле аминокислоты обычно связываются при помощи карбоксильных и х-аминогрупп. Так и лизин в белке связаи а-группой, а его &-аминогруппа остается свободной и легко вступает в химическую связь с разиыми веществами, в частности с фтординитробензолом (ДНФБ). Соединение лизина с ДНФБ имеет желтый цвет. По интенсивности окраски определяют содержание лизина. Лизин, имеощий в белке свободную &-аминогруппу, считаетсяпо этой аминогрупнедоступным длялизинорганизмасвязан сживотных.каким-либоЕсливеще-же ством, то использование его животными спижается {стр. 20). _ Реактивы: 2.5%-ный раствор 1-фтор-2,А-динитробензола в этиловом спирте, этиловый эфир, метоксикарбонилхлорид, буферный раствор с pH 8,5 (8%-ный МаНСО:;-+8%-ный М а2СОз в соотношении 19:1). Ход определения. В круглодонные колбочки помещают раздельно две пробы исследуемого материала, содержащие 30—50 мг азота. Добавляют 8 мл 8%-ного Na,COs и ставят на 10 минут. Затем добавляют 12 мл 2,5%-ного ДИФБ и встряхивают 2 часа. Колбочки нагревают в кипящей бане до начала кипения, доливают 24 мл 8,1 н. соляной кислоты (НС!) и минут 20 нагре-
|
47
