вают с обратным холодильником. После этого колбы раane = aes фильтрьтр ии раобъем “pubrpara,фильтрата доводятфильтводой до 200 мл. na анные0 2пробирки мл фильтратана10мл, вносятдобавляют постепеннопо5 вмл градунро-эфирав nema ара В oxuolt пробы нагревают в воде до испайе 1 С одной про “a объем раствора добавta титруют в олбосте до 10 мл. Затем 2 мл фильтраNuon x ona лбочке с фенолфталеином 10%-ным вание 2 мл фильтра щелочи, которое пошло на титроградуированной об добавляют к пробе во второй neа мyap вет0.045> i"0,058ирке,“Ocсюдаметоксикарбонилхлоридаже вливают 2 мл буфе-и оне и я С ee добавляют 0,75 мл рю рирова той 11, 5 мл эфира и дважды экстрадл до 10 мл ряхивания и удаления эфира объем Содержимое проб р р. ирок помещают в 10 мл кюветы и ие; его оптическую плотность при длине волны Е. Ponce Разность между плотностью первой и второй прооирками. дерется как экетинция ‚и сравнивается со стандартом — ДНФ — лизина, приготовляемым перед АТсериейОпределениеопределений. merионина. п При действиив меное вещество В moun м патрия получают окрашен содержание метионин пентрации которого определяют Ию stHM вом риптофан, дающий ту же реакролизе пробы.° » разрушается при кислотном гид. Сы орон, смесь (9 частеи копцентриро-: тота, НЕ 5 ТРЕн. едкий59 ‘vaneатр, 43„ : в. о.аствор6 и.едкогосолянаянатра,кис10%-ный раствор нитропруссида Натрия активированный уголь марки Б. 1%-ный . ни рован Ход. Ваботы: 500 ae ote ee ai Е HCI в ~ течение pos20 часовa прий 120°€ Сyi ObanRi у | MESЛ { a нейтрализованного 5 н. NaOH до pH 3,5р добавляютр 50 мл |и млобесцвечивают14,3 н. едкогоaуглем.натра,> 4%К | ‹5млмл« 1%фильтmomв атаaa в,до-a вна,течение‚ 0,39,3 млм. восьми10%-ного% мину+ итропруссидаб онатрия, нагреваютTEREо а затем 2 минуты лено Bete teGanamer 5 мл кислотнойОсмеси и после ывстряхиванияе. дают/авляютстоять 48
5 минутЕ прик, комнатпойизмеряют окраскутемпературе.и сравниваютПользуясьсофильт-станpon 6 ммк, измеряют окраску и сравнив: 2 vernountia в 100 мл 0,1 н. HCL. Для стандартной кривой готовят раствор из 40 мг Определение тринтофана. Триптофаи разрушается при кислотном гидролизе, поэтому ero пе определяют хроматографическими способами, используемыми для анализа амипокислот в кислотпых гидролизатах. Химический метод определения тринтофана основан на | сго свойстве давать с парадиметиламинобензальдегидом | окраску,нейтрации интеами н окислосивнос т ьы. которой пропорциональнар кон|| Реактивы: 9,5%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида в 10%-пой серной кислоте, гидролизат жела| rina (35 мг желатина кипятят 2 часа в колбе с обратным холодильником с 2 мл 1 в. NaOH), 2%-ный раствор изотнокислого натрия, 50%-ный этиловый спирт, концеитрированная HCl. Ход определения. 10—20 мг белка гидролизуют 2 часа на слабом огне при помощи 2 мл гидролизата желаТИНЫ у 25%-ногоК охлажденномураствора парадиметиламинобензальдегида,гидролизату добавляют 0,5 мл | затем 0,2 мл 2%-ного раствора азотнокислого натрия и | — | 14 мл концентрированной HCl. Через час быстро прили| вают 15—90 мл 50%-ного спирта, взбалтывают и переносят в колбочки на 50 мл, доводя тем же спиртом объемкомпонентов,до метки.кромеКонтрольнуюиспытуемогопробуобразца.готовят из тех же | Полученноери значение» экстинции сравниваютя с кали| бровочной кривой, которую ВЫВОДЯТ из стане иоге ряда, получаемого из раствора 100 мг триптофана в | 100 мл дистиллированной воды. Из него готовят несколъко растворов с содержанием от 0,1 до 0,6 мг триптофана | в 1 wat. Каждого раствора берут по | мл, добавляют | 0,5 мл 2.5%-Horo раствора, парадиметиламинобенааль. | дегида, 0,2 мл 2%-ного раствора нитрата натрия и 4014 мипутмл концентрированнойнагревают в бане присоляной40°,о доливаюткислоты.15-20Затеммл 50%-ного спирта и доводят объем до 50 мл. По изменениюоткладываяо экстинциипо осиэтихординатрастворовоптическуювычерчиваютплотность,кривую,а :по оси абсцисс концентрацию триптофана. ] А Н, А, Шмапенков 49 | | |
Определение глицина. Для всех Животных, кроме цыплят, глицин является заменимой аминокислотой. Поэтому на его содержание во всех рационах, кроме птичьих, почти не обращали внимания. Однако, как значениевыяснилось в последнее время, глицин имеет большое пика для всех животных в качестве важного источет на такэффективностьназываемогоазотазаменимогонезаменимого.азота, который влия`Глицин дает с хромотроповой кислотой в присутствии серной окрашенный продукт, по концентрации которого судят о содержании аминокислоты. в воде,Реактивы:1%-Hbiii5%-ныйводныйрастворраствор хромотроповойнингидрина, фосфатныйкислоты буфер с pH 5,5 (который приготовляют из 3,5 г КзРО., 100 мл 20% -ного раствора KH»PQ,) и концентрированная серная кислота. 100Ходмл помещаютопределения.0,5 млВ гидролизатаколбу Кьельдалябелка, 2 объемоммл фосник C 5 мл воды отгоняют 7 мл раствора и ставят его в ледянуюфатного буфераводу. Виколбу| мл наливаютраствора нингидрина.5 мл воды иВвыпари-приемвают содержимое досуха, собирая дистиллят в тот же приемник. Объем дистиллята доводят водой до 95 мл, после перемешивания берут 5 мл в пробирку, в которую после охлаждения до O° постепенно вводят 4 мл концентрированной серной кислоты. Смесь выдерживают до комнатной температуры и затем добавляют 3 капли раствора хромотроповой кислоты, взбалтывают и держат в кипящей воде 30 минут. После охлаждения фотометрируют с фильтром 560 ммк. Расчет проводят по калибровочной кривой, которую строят по данным анализа известных концентраций глицина.Белок гидролизуют так же, как для определения метионина.
Хроматографические методы Большие изучении успехи, достигнутые за последние годы в питания, многихаминокислотногобелков органовсоставаи тканейкормов,растенийпродуктови животных, свойств отдельных аминокислот и т. д., связаны с применением хроматографических методов исслсдования.
Aa
