ты в пробе, а затем путем пересчета — во всем исследуемом материале. Определение лизина. Лизин— важнейшая незаменимая аминокислота, обычно дефицитная в растительных рационах. Лизин не во всех кормах доступен оргапизму животных. Поэтому его чаще, чем другие незаменимые аминокислоты, определяют в кормах как в количественпиом отношении, так и по доступности его для животных.
Как известно, лизин имеет две аминогруппы— при первом и пятом углеролах от карбоксильной группы. 5 4 3 о 1 СН.— СН. --CH.—CH,.—CH —COOH | _ - - 7 ' , NH. NH, 7 . - Напомним, что первый углерод от карбоксила называется альфа-углеродом (a), а пятый — эпсилон-углеродом (&). Поэтому и аминогруппы в лизиие обозначаются: прин первом углеродном атоме’ а-группой, а при пятом — г‚аминогруппой. В белковой молекуле аминокислоты обычно связываются при помощи карбоксильных и х-аминогрупп. Так и лизин в белке связаи а-группой, а его &-аминогруппа остается свободной и легко вступает в химическую связь с разиыми веществами, в частности с фтординитробензолом (ДНФБ). Соединение лизина с ДНФБ имеет желтый цвет. По интенсивности окраски определяют содержание лизина. Лизин, имеощий в белке свободную &-аминогруппу, считаетсяпо этой аминогрупнедоступным длялизинорганизмасвязан сживотных.каким-либоЕсливеще-же ством, то использование его животными спижается {стр. 20). _ Реактивы: 2.5%-ный раствор 1-фтор-2,А-динитробензола в этиловом спирте, этиловый эфир, метоксикарбонилхлорид, буферный раствор с pH 8,5 (8%-ный МаНСО:;-+8%-ный М а2СОз в соотношении 19:1). Ход определения. В круглодонные колбочки помещают раздельно две пробы исследуемого материала, содержащие 30—50 мг азота. Добавляют 8 мл 8%-ного Na,COs и ставят на 10 минут. Затем добавляют 12 мл 2,5%-ного ДИФБ и встряхивают 2 часа. Колбочки нагревают в кипящей бане до начала кипения, доливают 24 мл 8,1 н. соляной кислоты (НС!) и минут 20 нагре-
|
47
вают с обратным холодильником. После этого колбы раane = aes фильтрьтр ии раобъем “pubrpara,фильтрата доводятфильтводой до 200 мл. na анные0 2пробирки мл фильтратана10мл, вносятдобавляют постепеннопо5 вмл градунро-эфирав nema ара В oxuolt пробы нагревают в воде до испайе 1 С одной про “a объем раствора добавta титруют в олбосте до 10 мл. Затем 2 мл фильтраNuon x ona лбочке с фенолфталеином 10%-ным вание 2 мл фильтра щелочи, которое пошло на титроградуированной об добавляют к пробе во второй neа мyap вет0.045> i"0,058ирке,“Ocсюдаметоксикарбонилхлоридаже вливают 2 мл буфе-и оне и я С ee добавляют 0,75 мл рю рирова той 11, 5 мл эфира и дважды экстрадл до 10 мл ряхивания и удаления эфира объем Содержимое проб р р. ирок помещают в 10 мл кюветы и ие; его оптическую плотность при длине волны Е. Ponce Разность между плотностью первой и второй прооирками. дерется как экетинция ‚и сравнивается со стандартом — ДНФ — лизина, приготовляемым перед АТсериейОпределениеопределений. merионина. п При действиив меное вещество В moun м патрия получают окрашен содержание метионин пентрации которого определяют Ию stHM вом риптофан, дающий ту же реакролизе пробы.° » разрушается при кислотном гид. Сы орон, смесь (9 частеи копцентриро-: тота, НЕ 5 ТРЕн. едкий59 ‘vaneатр, 43„ : в. о.аствор6 и.едкогосолянаянатра,кис10%-ный раствор нитропруссида Натрия активированный уголь марки Б. 1%-ный . ни рован Ход. Ваботы: 500 ae ote ee ai Е HCI в ~ течение pos20 часовa прий 120°€ Сyi ObanRi у | MESЛ { a нейтрализованного 5 н. NaOH до pH 3,5р добавляютр 50 мл |и млобесцвечивают14,3 н. едкогоaуглем.натра,> 4%К | ‹5млмл« 1%фильтmomв атаaa в,до-a вна,течение‚ 0,39,3 млм. восьми10%-ного% мину+ итропруссидаб онатрия, нагреваютTEREо а затем 2 минуты лено Bete teGanamer 5 мл кислотнойОсмеси и после ывстряхиванияе. дают/авляютстоять 48
5 минутЕ прик, комнатпойизмеряют окраскутемпературе.и сравниваютПользуясьсофильт-станpon 6 ммк, измеряют окраску и сравнив: 2 vernountia в 100 мл 0,1 н. HCL. Для стандартной кривой готовят раствор из 40 мг Определение тринтофана. Триптофаи разрушается при кислотном гидролизе, поэтому ero пе определяют хроматографическими способами, используемыми для анализа амипокислот в кислотпых гидролизатах. Химический метод определения тринтофана основан на | сго свойстве давать с парадиметиламинобензальдегидом | окраску,нейтрации интеами н окислосивнос т ьы. которой пропорциональнар кон|| Реактивы: 9,5%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида в 10%-пой серной кислоте, гидролизат жела| rina (35 мг желатина кипятят 2 часа в колбе с обратным холодильником с 2 мл 1 в. NaOH), 2%-ный раствор изотнокислого натрия, 50%-ный этиловый спирт, концеитрированная HCl. Ход определения. 10—20 мг белка гидролизуют 2 часа на слабом огне при помощи 2 мл гидролизата желаТИНЫ у 25%-ногоК охлажденномураствора парадиметиламинобензальдегида,гидролизату добавляют 0,5 мл | затем 0,2 мл 2%-ного раствора азотнокислого натрия и | — | 14 мл концентрированной HCl. Через час быстро прили| вают 15—90 мл 50%-ного спирта, взбалтывают и переносят в колбочки на 50 мл, доводя тем же спиртом объемкомпонентов,до метки.кромеКонтрольнуюиспытуемогопробуобразца.готовят из тех же | Полученноери значение» экстинции сравниваютя с кали| бровочной кривой, которую ВЫВОДЯТ из стане иоге ряда, получаемого из раствора 100 мг триптофана в | 100 мл дистиллированной воды. Из него готовят несколъко растворов с содержанием от 0,1 до 0,6 мг триптофана | в 1 wat. Каждого раствора берут по | мл, добавляют | 0,5 мл 2.5%-Horo раствора, парадиметиламинобенааль. | дегида, 0,2 мл 2%-ного раствора нитрата натрия и 4014 мипутмл концентрированнойнагревают в бане присоляной40°,о доливаюткислоты.15-20Затеммл 50%-ного спирта и доводят объем до 50 мл. По изменениюоткладываяо экстинциипо осиэтихординатрастворовоптическуювычерчиваютплотность,кривую,а :по оси абсцисс концентрацию триптофана. ] А Н, А, Шмапенков 49 | | |
