Определение глицина. Для всех Животных, кроме цыплят, глицин является заменимой аминокислотой. Поэтому на его содержание во всех рационах, кроме птичьих, почти не обращали внимания. Однако, как значениевыяснилось в последнее время, глицин имеет большое пика для всех животных в качестве важного источет на такэффективностьназываемогоазотазаменимогонезаменимого.азота, который влия`Глицин дает с хромотроповой кислотой в присутствии серной окрашенный продукт, по концентрации которого судят о содержании аминокислоты. в воде,Реактивы:1%-Hbiii5%-ныйводныйрастворраствор хромотроповойнингидрина, фосфатныйкислоты буфер с pH 5,5 (который приготовляют из 3,5 г КзРО., 100 мл 20% -ного раствора KH»PQ,) и концентрированная серная кислота. 100Ходмл помещаютопределения.0,5 млВ гидролизатаколбу Кьельдалябелка, 2 объемоммл фосник C 5 мл воды отгоняют 7 мл раствора и ставят его в ледянуюфатного буфераводу. Виколбу| мл наливаютраствора нингидрина.5 мл воды иВвыпари-приемвают содержимое досуха, собирая дистиллят в тот же приемник. Объем дистиллята доводят водой до 95 мл, после перемешивания берут 5 мл в пробирку, в которую после охлаждения до O° постепенно вводят 4 мл концентрированной серной кислоты. Смесь выдерживают до комнатной температуры и затем добавляют 3 капли раствора хромотроповой кислоты, взбалтывают и держат в кипящей воде 30 минут. После охлаждения фотометрируют с фильтром 560 ммк. Расчет проводят по калибровочной кривой, которую строят по данным анализа известных концентраций глицина.Белок гидролизуют так же, как для определения метионина.
Хроматографические методы Большие изучении успехи, достигнутые за последние годы в питания, многихаминокислотногобелков органовсоставаи тканейкормов,растенийпродуктови животных, свойств отдельных аминокислот и т. д., связаны с применением хроматографических методов исслсдования.
Aa
‚ лежитВ основеразработанныйсовременныхв началехроматографическихХХ века русским методовученым М. С. Цветом метод разделения смеси раствореппых, близких в химическом отношении веществ избиратсльной адсорбцией на столбике адсорбеита. До Цвета считали, что в зеленых частях растеций. содержится только один пигмент хлорофилл. Цвет приготовил водную вытяжку пигмента растений и peшил его отфильтровать «через столбик окиси аммония», помещенного ‘cn в стеклянную трубку или колонку, О ини как показано на рисунке 1. О eavpepure Оказалось, что в результате su) фильтрования пигмент листьев разт делился, по крайней мере, на четыИН ре вещества, распределившихся на ИХ — разных высотах столбика адсорНЫ бента. в После анализа было установБАЦ “проти содержит определенное вещество В лено,Начинаячтосверхукаждаяэтимизонавеществамиокраски i оказались ксантофилл, затем хло— рофилл, В-каротин и оа-каротин. И Они осели на поверхности частиц bi окиси алюминия, но вследствие | `\ разной способности к адсорбции Mes Waa они распределились в разных Me(ey стах колонки. <= Со временем было испытано огPitt! 1. Anéopoivionромное количество адсорбентов, пая оп og разных форм сосудов для адсорбM. С Цвету после ции ит. д. В настоящее время хропрохождения pactroматографический анализ очень ЙА пигмента из лимногих смесей веществ, в том чис oe ле аминокислот, проводят на бумаre (бумажная хроматография) и на колонках (колоичагая хроматография). При этом было выяснено, что хроматография основана на адсорбини (адсорбционная хроматография) и распределении веществ между несмешительнаявающимисяхроматография).растворителямиПо-видимому,пли фазамиочень(распредели-часто оба ; а netic 5 эти принципа действуют одновременно.
4*
51
Поясним сущность этих двух процессов ири помощи схематического изображения (рис. 2). В процессе адсорбции молекулы растворенного вещества концентрируются на открытой поверхности частиц адсорбента. Скорость адсорбции веществ при прохож дении раствора через колонку зависит от адеорбционной их активности. Наиболее активные вещества адсорби руются быстро в верхней части колонки, а менее актив ные — в нижней. Многие вещества растворяются в несмешивающихся растворителях. Например, аминокислоты растворяются
растворителях. Например, аминокислоты растворяются МЛС: Ja СА.a = ввомводеспирте.и в бутило-Если к Я быть, ух раствору аминокисЕ UR: Res 30. лоты в воде доба ge PE № prem a BHTb бутилового НА a ce в спирта, часть молса i ae 4 29 кул аминокислоты жа SE ЗЕ yas: ee перейдет из воды в А ь бутанол. Если одии ИЗ растворителей, рис.адсорбции2. Схемалическое(А) и распределенияизображениемежнапример воду, cAeду жидкими фазами (Б). лать пеподвижным I — нодвнжиая Gaza: лее. (слева) MENON (неподвижная фавижная фаза; п (Справа) ситель — твердый ко за), то ири продви неподвижной жидкой фазы, жении второй фазы растворенное в пей вещество целиком перейдет в неподвижную фазу— Boду и сконцентрируется в определенном месте согласпо закону распределения. (Б)Этотрисункапроцесс2, гдеиллюстрируетсявода, адсорбируясьна правойна поверхностиполовине частиц адсорбента, стала неподвижной фазой, извлекающей молекулы растворенного вещества из проходящей подвижной фазы, TO есть бутанола. На принципе распределения веществ между фазами основала бумажнаястоитХроматографияхроматографияиз волокон клетчаткиаминокислотвеществ, разнойв томна бумаге.числевеличины,аминокислот.Бумагапа кото-сорых могут адсорбироваться молекулы растворенного вещества или растворителя. Вследствие этого бумагу соответствующих сортов стали применять в хроматографическом анализе смесей веществ в растворе, в том числе и аминокислот.
