ку отбирают | или 2 мл элюата. По окончании элюирования в пробирку с элюатом добавляют | мл ниигидрнинового раствора, встряхивают и штатив помещают в кипящую водяную баню па 15 минут. После охлаждения до комнатной температуры в пробирку, где появилось окрашивание, добавляют 5 мл 50%-Horo этилового спирта, встряхивают и колориметрируют. Если пробирки оптически однородны, то можно колориметрировать ирямо в них, не переливая в кюветы прибора. Измеряют амипокислоты с зеленым светофильтром р й при 570 MMK, а пролин и оксипролин с синим свето50%-номуфильтром этанолу.при 440Содержаниеmmx. Приборыаминокислотнастраиваютрассчиты-по вают по калибровочной кривой, для этого растворяют 13,1 мг лейцина в 100 мл бу. Н 3,25 3, Ц л буферного раствора с рН 3,25. добавляютИз этого растворадо 10 млберутбуферногов пробиркираствора1, 2, и3, колоримет-4, 5, 6 мл, рируют. По данным этой колориметрии строят калибровочную кривую. Так как за единицу определения берут лейцин, то в расчет содержания аминокислот вносят поправку, пользуясь даниыми интенсивности окраски их приведенными в таблице 9, у TaGanna 9 Интенсивность окраски аминокислот по сравнению с лейцином ОО О g Е Е xoammncsain | EE |) Awmornesora || 22 |) ие ge ЕЕ | Be 23 28 | gs | 38 О Оо По — ыы ны ...| 0,55 | Цитруллии 1,04 а кислота . | 054 Merona ВИ 102 Голотамин ..| 0,99 Греонин ... |0, золейции. .| 1,00 | Аспарагии 0,95 Cepun ....| 0,95 | Фенилаланин 1,00 | 1-аминомасляПролинГлютаминовая... 0,22' |Ре Лизин. ...|..| 1,10102 | Оксипролинпая кислота | 6,0771,02 в . Oe | a в о Count .. ee ВалиАлании.5.... ‘|097| 097 oa| Tupoaun.. .2 2}‚| 100100 || Амунак (1097| | | | |
Обычно концентрацию аминокислот выражают в микромолях на 100 мл, при переводе в граммы микромоли умножают па молекулярный вес. Амниокислоты с осБН. A, Шманонков 65
новными свойствами определяют па колонке высотой 15 см, буферный раствор используют с РН 5,28, скорость вышевытекания10 смэлюатартутногоравнастолба,25—30температурамл в час, 50°давление С. Коли-не чество образца в два раза меньше, чем при работе на больших колопках. Техника внесения та же. При гидролизе белков часть аминокиелот и амидов разрушается, а их азот переходит в форму аммиака, который выделяется вместе с осповпыми кислотами и дает с ипигидрином окравишавие. Осповные аминокислоты эиопруются в следующем порялкс: лизии, гистидин, аргилии. Аммнак обычно выходит после гисти-
Приготовление реактивов
Нингидриновый реактив. Растворяют в 750 мл мстилнеллозольва 20 г нингидрина и 3 г гидриндантина, добавляют 250 мл буфервиого раствора c pil 5,5. Реактив быстро помешают в сосуд из темного стекла под Ниигидрин ипримспяют химически чистый. Продажный реактив перекристалаизовывают. Для этого 100 г вещества растворяют в 200 мл дистиллированной воды, нагрерают почти до кипения, прибавляют около 5 гактивированного угля и через 19 12 мипут фильтруют. При быстром охлаждении выпалают кристаллы. После промывки их высушивают и в таком виде используют Метилцеллозольв очишаюг добавлением к 500 мл 1-2 г сернокислого закисного экелеза и отгонкой носne 23-часового выпаривапия. Используют фракцию, выделяющуюся нри температуре 116—2126°С. Для приготовления гидриндантина растворяют 80 г нингидрина в двух литрах воды, иагретой до 90°, и добавляю 400 wt 5508 -пого naamnopa аоеорОЩОной kite лоты. Через 30 мипут смесь охлаждают до компатион температуры, выпадают кристаллы гидриндаитниа, которые отфильтровывают, промывают водой и сушат в эксикаторе пад фосфорпым ангидридом. Буферный раствор с pH 5,5 готовят, растворяя в двух литрах воды 1640 г безводного или 2720 г с тремя молекулами кристаллизационной воды (NaCoH 0» + 3H,0) уксуснокислого натрия. Приливают 500 мл ледяной yKсусной кислоты и до 5 л волы fn
$
‘Автоматизация хроматографии аминокиспот
на колонках
де, seeаи время появилось| миоРо устройств| по а, КОЛИполках© соу смоламияXpomarol рафированню аминокислот
4 -
о OR hasан
ее и а
oe ие i ae Sickinn Е И 3% а ie Di ee é
р
а: в о eae те в
Е от
О, ое О.
а Е -
а.
а Boas: и аЕ |
а aeее
Ue a ie Bie Be aa ae areas
в ие, = И
= _
а ИЕ
ны р Se ace a eae
И boо
о ейо
и. ae й al Ciel see
а а Pat а
ры: а о
и eh nae tee a ge = :
ee Pig ое dient :
oe Bie a: Re eo,
er ee та не
к ee не м uae ¥
анти Ры.и п:
м
о ее. ey
О ее В
- Рис. 5. Колонка для хроматографии аминокислот на бумаге
