свету и при температуре от 20 до 30 °С, при хранении в темном месте, снижение происходило в меньшей степени.
Методом диффузии в агар на чашках Петри установлена исходная антимикробная активность свежеприготовленного препарата в отношении музейных штаммов золотистого стафилококка, гноеродного стрептококка, кишечной палочки, протея вульгарного, синегнойной палочки, гриба из рода Кандида составила задержку зоны роста микробов, после инкубирования в термостате: 18–26 мм (в среднем 21,8 ± 1,6 мм).
При разных режимах в процессе хранения обнаружены изменения антимикробной активности препарата, которые приведены в таблице 14.
Таблица 14 – Антимикробная активность препарата в зависимости от времени и условий хранения.
| Режим хранения | Зона задержки роста микробов (мм) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| исходны й уровень | через 1–6 мес | через 12 мес | через 18 мес | через 24 мес | через 36 мес | |
| 1…5 оС а) при свете б) в темноте | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 24,7 + 1,2 24,7 ± 1,2 | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 24,1 + 0,7 24,7 + 0,9 | 22,6 + 1,1 24,2 + 0,6 | 19,2 + 1,2 20,5 + 1,2 |
| 2.10…20 °С а) при свете б) в темноте | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 24,3 + 1,6 24,5 + 1,6 | 24,0 + 1,01, 21,6 + 1,0 | 19,8 + 1,0 20,8 + 1,2 | 18,5 ± 1,1 19,8 + 1,2 |
| 3.22…30 °С а) при свете б) в темноте | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 24,7 + 1,2 24,7 + 1,2 | 22,4 ± 1,8 23,6 ± 1,6 | 19,2 + 1,2 20,6 + 0,8 | 18,0 + 1,4 19,0 + 1,3 | 17,5 + 1,0 18,3 ± 1,3 |
Результаты представленных данных, в течение первых 6 мес хранения препарата при разных режимах его антимикробная активность оставалась на исходном уровне. Спустя 1 год хранения препарата при разных температурных режимах, но без доступа света его антимикробная активность
сохранялась в основном в пределах исходного уровня, а в освещенном месте незначительно снижалась. По истечении 1,5–2 лет хранения препарата его антимикробная активность снизилась: при температурном режиме 0…5 °С без доступа света – на 3 %, в освещенном месте – на 6 %; б) при температурном режиме 10…20 °С без доступа света – на 6 %, в освещенном месте – на 10 %; в) при температурном режиме 22…30 °С без доступа света – на 19 %, в освещенном месте и на 13 %. После трехлетнего хранения препарата его антимикробная активность в сравнении с исходным уровнем уменьшилась: а) при температурном режиме 0…5 °С без доступа света – на 6 %, в освещенном месте – на 12 %, б) при температуре 10…20 °С без доступа света – на 9 %, в освещенном месте – на 15 %; в) при температуре 22…30 °С без доступа света – на 16 %, в освещенном месте на 16 %.
На основании изложенного можно сделать заключение о том, что при температуре 10…20 °С без доступа света препарат наиболее долго сохраняет свои исходные качества максимально выраженные в течение года. Это оптимальный режим хранения. И хотя в последующие 2 года снижение этих качеств не столь значительное, но учитывая возможные в условиях практики нарушения режима хранения, гарантированным может быть годичный срок хранения.
4.3 Экспериментальная оценка нового противоэндометритного препарата
В соответствии с требованиями Ветфармбиосовета РФ, экспериментальная оценка противоэндометритного препарата включала исследования, характеризующие как его специфическую активность, так и безвредность.
Биологическое действие препарата оценивали по комплексу тестов: антимикробной активности, противовоспалительным и антиаллергическим свойствам, влиянию на регенеративные процессы и местный иммунитет.
Антимикробные свойства препарата invitro определяли методами серийных разведении препарата в МПБ и жидкой питательной среде Сабуро, в концентрациях от 0,5 мл (542,5 мг)/мл до 0,00000094 мл (0,00103 мг)/мл, а также диффузии в агар. В первом случае в серию стерильных пробирок разливали по 2 мл МПБ, В первую пробирку добавляли 2 мл препарата определенной концентрации, после перемешивания 2 мл смеси переносили в следующую пробирку, продолжая, таким образом, разведение до предпоследней пробирки, из которой удаляли 2 мл содержимого. Последняя, 21-я пробирка, служила контролем роста тест-культуры. В МПБ готовили взвесь суточной культуры испытуемого микроба, 0,2 мл которой с содержанием 1000 микробных тел добавляли во все пробирки и помещали последние в термостат для инкубирования. Результаты учитывали через 6, 12, 24, 48, 72, 96 ч инкубирования.
Бактериостатические и бактерицидные свойства препарата определяли визуально по отсутствию роста культуры в опытных пробирках наибольшее разведение препарата, в котором отсутствовало размножение тест – микробов и не отмечалось помутнение среды в течение 24 ч, принимали за минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК), а в течение 96 ч минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК). Аналогично определяли фунгистатическую и фунгицидную активность препарата. Из опытных пробирок в течение первых суток периодически осуществляли высев на агар с целью установления необходимой экспозиции контакта препарата с тест – микробом для проявления бактерицидного эффекта. При использовании метода диффузии препарата в агар на поверхность МПА (или голодного агара со средой Чапека), разлитого в чашки Петри по 20 мл, наносили испытуемую микробную культуру (1 млрд микробных тел в 1 мл
