Ориентировочное представление о функциональном состоянии яичников, степени их гормональной активности можно составить по показателю гликогенового теста. На предметном стекле делают мазки-отпечатки из слизи преддверия влагалища и высушивают на воздухе. Потом их переносят в бактериологические чашки с раствором Люголя (йода – 1 ч, калия йодида – 2 ч, дистиллированной воды – 17 частей) на 2 – 3 мин и высушивают на воздухе. В эпителиальных клетках, содержащих гликоген, цитоплазма окрашивается в коричневый, темно-коричневый или слабо желтый цвет; ядра не окрашиваются. В мазке подсчитывают 100 клеток и вычисляют процентное отношение окрашенных клеток к общему количеству подсчитанных, что и характеризует гликогеновый индекс. На 17, 20, 21, 1 и 2-й день полноценного полового цикла гликогеновый индекс равен 75 – 80 %, на 6 – 11-й день 15 – 20 %, в период с 4 – 5-го по 13 – 15-й день – 35–50 %. Понижение гликогенового индекса свидетельствует о низкой гормональной активности яичников. А. О. Манасян (1967) предложил определять клеточный состав цервикально-вагинальной слизи, из которой на предметном стекле готовят мазки-отпечатки, окрашенные по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом подсчитывают 500 эпителиальных клеток, в том числе больших, средних, малых, безъядерных и деформированных, определяя их соотношение. При кистозном перерождении яичников количество средних эпителиальных клеток доходит до 43 – 68 % (в норме их от 9 до 37 %), тогда, как больших и малых сравнительно мало (в норме больших от 2 – 12 до 61 – 70 %, а малых от 6 – 8 до 71 – 78 %), а безъядерные отсутствуют. При кисте желтого тела и персистентном желтом теле увеличивается количество малых и безъядерных клеток (сдвиг картины мазка вправо).
Иммунологические исследования включают определение уровня общей неспецифической резистентности организма (по
фагоцитарной активности лейкоцитов крови, лизоцимной активности и бактерицидности крови и другим тестам), а также характер локального иммунитета матки (по фагоцитарной активности лейкоцитов в отношении к микробам в окрашенных мазках-отпечатках маточных выделений) и вымени (по лизоцимной активности молока и фагоцитарной активности лейкоцитов молока). Наряду с этим для диагностики иммуногенного бесплодия определяют титр спермиоантител (спермиагглютининов) в сыворотке крови (по К. Братинову и В. Дикову). Спермиоаггглютинационная проба заключается в следующем. В 11 (или более) стерильных пробирок наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. В первую пробирку добавляют 1 мл сыворотки крови испытуемой самки и смешивают с раствором. Затем 1 мл смеси переносят во вторую пробирку, из второй в третью, и в такой последовательности продолжают разведение до 11-й пробирки, из которой 1 мл содержимого выливают. В результате получают разведение сыворотки крови в геометрической прогрессии – 1 : 1, 1 : 2, 1 : 4, 1 : 16, 1 : 32, 1 : 64, 1 : 128, 1 : 256, 1 : 512, 1 : 1024. В каждую пробирку добавляют по 2 капли 2%-й суспензии отмытых спермиев производителя, спермой которого неоднократно осеменяли самку. Содержимое пробирок смешивают и помещают на 30 мин в термостат при температуре + 37 °С. Учет реакции проводят под микроскопом. Для этого в луночку предметного стекла пастеровской пипеткой помещают небольшую каплю содержимого из каждой пробирки, накрывают покровным стеклом и рассматривает под микроскопом. Реакция считается отрицательной, если в поле зрения отсутствуют склеенные спермии или имеются единичные половые клетки, головки которых склеены; сомнительной – при агглютинации головок спермиев в разбавлении 1 : 256 и ниже; положительной при титре 512 и более (все спермии склеены головками). У коров с нормальной плодовитостью титр спермиоагглютининов не
превышает 1 : 64, а у телок – 1 : 32. Предложены методы определение титра спермиотоксинов и спермиолизинов, реакция преципитации по обнаружению спермиоантител.
Иммунобиологическую несовместимость пар по группам крови без учета их групповой принадлежности можно определить реакцией изогемоагглютинации на предметном стекле (приемлемо для лошадей) или в пробирке (предлагается при исследовании, других видов животных). Первый из названных способов заключается в следующем. На чистое предметное стекло наносят две капли сыворотки крови самки и добавляют к ней каплю разведенной в 5 раз физиологическим раствором цельной крови производителя. После смешивания капель сыворотки и крови в течение 10 мин наблюдают за результатами реакции изогемоагглютинации. Отрицательной (пара совместима по группам крови) считается реакция, когда после 10 мин на предметном стекле остается неизменная однородная смесь с отсутствием малейших намеков на образование «песка» или комочков из эритроцитов. Под микроскопом при этом видны целые одиночно расположенные эритроциты. При положительной реакции агглютинации (пара не совместима), которая обычно наступает в ближайшие 5 мин с момента смешивания крови с сывороткой, на предметном стекле появляются видимые невооруженным глазом мельчайшие красные зернышки («песок»), образовавшиеся из слившихся эритроцитов; мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна «комочки», а иногда в хлопья неправильной формы. Покачивание стекла и добавление физраствора этих комочков не разрушает. Микроскопическая картина положительной реакции характеризуется наличием в поле зрения значительных бесформенных комочков состоящих из агглютинированных эритроцитов.
Сущность второго способа такова. В небольшую стеклянную пробирку вносят пипеткой 1 мл сыворотки самки
