фагоцитарной активности лейкоцитов крови, лизоцимной активности и бактерицидности крови и другим тестам), а также характер локального иммунитета матки (по фагоцитарной активности лейкоцитов в отношении к микробам в окрашенных мазках-отпечатках маточных выделений) и вымени (по лизоцимной активности молока и фагоцитарной активности лейкоцитов молока). Наряду с этим для диагностики иммуногенного бесплодия определяют титр спермиоантител (спермиагглютининов) в сыворотке крови (по К. Братинову и В. Дикову). Спермиоаггглютинационная проба заключается в следующем. В 11 (или более) стерильных пробирок наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. В первую пробирку добавляют 1 мл сыворотки крови испытуемой самки и смешивают с раствором. Затем 1 мл смеси переносят во вторую пробирку, из второй в третью, и в такой последовательности продолжают разведение до 11-й пробирки, из которой 1 мл содержимого выливают. В результате получают разведение сыворотки крови в геометрической прогрессии – 1 : 1, 1 : 2, 1 : 4, 1 : 16, 1 : 32, 1 : 64, 1 : 128, 1 : 256, 1 : 512, 1 : 1024. В каждую пробирку добавляют по 2 капли 2%-й суспензии отмытых спермиев производителя, спермой которого неоднократно осеменяли самку. Содержимое пробирок смешивают и помещают на 30 мин в термостат при температуре + 37 °С. Учет реакции проводят под микроскопом. Для этого в луночку предметного стекла пастеровской пипеткой помещают небольшую каплю содержимого из каждой пробирки, накрывают покровным стеклом и рассматривает под микроскопом. Реакция считается отрицательной, если в поле зрения отсутствуют склеенные спермии или имеются единичные половые клетки, головки которых склеены; сомнительной – при агглютинации головок спермиев в разбавлении 1 : 256 и ниже; положительной при титре 512 и более (все спермии склеены головками). У коров с нормальной плодовитостью титр спермиоагглютининов не
превышает 1 : 64, а у телок – 1 : 32. Предложены методы определение титра спермиотоксинов и спермиолизинов, реакция преципитации по обнаружению спермиоантител.
Иммунобиологическую несовместимость пар по группам крови без учета их групповой принадлежности можно определить реакцией изогемоагглютинации на предметном стекле (приемлемо для лошадей) или в пробирке (предлагается при исследовании, других видов животных). Первый из названных способов заключается в следующем. На чистое предметное стекло наносят две капли сыворотки крови самки и добавляют к ней каплю разведенной в 5 раз физиологическим раствором цельной крови производителя. После смешивания капель сыворотки и крови в течение 10 мин наблюдают за результатами реакции изогемоагглютинации. Отрицательной (пара совместима по группам крови) считается реакция, когда после 10 мин на предметном стекле остается неизменная однородная смесь с отсутствием малейших намеков на образование «песка» или комочков из эритроцитов. Под микроскопом при этом видны целые одиночно расположенные эритроциты. При положительной реакции агглютинации (пара не совместима), которая обычно наступает в ближайшие 5 мин с момента смешивания крови с сывороткой, на предметном стекле появляются видимые невооруженным глазом мельчайшие красные зернышки («песок»), образовавшиеся из слившихся эритроцитов; мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна «комочки», а иногда в хлопья неправильной формы. Покачивание стекла и добавление физраствора этих комочков не разрушает. Микроскопическая картина положительной реакции характеризуется наличием в поле зрения значительных бесформенных комочков состоящих из агглютинированных эритроцитов.
Сущность второго способа такова. В небольшую стеклянную пробирку вносят пипеткой 1 мл сыворотки самки
и 2 – 3 капли разведенной крови производителя, встряхиванием пробирки содержимое перемешивается. Пробирку оставляют на 1 ч в спокойном состоянии при комнатной температуре (лучше после центрифугирования в течение 1 – 2 мин при 1500 – 2000 оборотах/мин). Для оценки результатов пробирку встряхивают. При агглютинации (положительная реакция) заметны 1 – 2 комка или несколько маленьких комочков агглютинированных эритроцитов. При отсутствии агглютинации (отрицательная реакция) остается равномерно окрашенная смесь. Но наиболее приемлемой реакцией изогемоагглютинации для животных с низким аглютинационным титром сыворотки является реакция изогемоагглютинации в капилляре. Для ее постановки берут стеклянную трубку длиной 9 – 10 см диаметром 1 мм и в ней смешивают сыворотку крови самки со взвесью (1 : 10) эритроцитов производителя. Заполняют капилляр сывороткой и эритроцитами поочередным опусканием конца его сначала во взвесь эритроцитов а затем в сыворотку (жидкость в трубку поступает в силу закона капиллярности). Количество эритроцитов должно быть в 2 – 3 раза меньше сыворотки. Капилляр заполняют смесью наполовину или на одну треть, чтобы столбик жидкости мог перемещаться по капилляру. Для смешивания сыворотки и эритроцитов капилляру придают вертикальное положение. Когда жидкость достигает конца капилляра последний поворачивают в обратную сторону (требуется 2 – 3 таких поворота). Агглютинацию в капилляре можно наблюдать невооруженным глазом после 10 мин выдерживания при температуре 15 … 20 С: появляются мелкие комочки вдоль всей трубки. При отсутствии агглютинации эритроциты в горизонтально расположенном капилляре размещаются тонким слоем на его нижней стенке.
Другие методы лабораторных исследований изложены при описании соответствующих заболеваний.
