путем нагрева в микроволновой печи в специальной посуде с перфорированным дном при этом жидкая составляющая отделяется самотеком а нагрев производят не выше 60°С, причем в качестве разбавляющей среды для жидкой фазы используют 0,9%ный раствор натрия хлорида .
Недостатком этого способа является то, что отделение (получение) жидкой составляющей из плаценты производят под действием микроволнового излучения, т.е. подвергая действующее лечебное начало плюсовой температурой выше температуры тела у животного (+39°С) а так же микроволновому облучению с активностью 900-1400 ватт трехкратной обработкой по 20 минут, и в четвертый раз обрабатывают кипячением, затем автоклавирование при 1,5 атм в течение 1 часа.
Такая термическо-микроволновая, магнитно-полярная обработка природных биологически активных веществ содержащих лечебные компоненты: ферменты, гормоны созданные природой в нанобиологических структурах теряют свои лечебные бактерицидные, бактериостатические свойства.
Задача, на решение которой направленно данное изобретение, заключается в создании способа получения лечебного препарата пригодного для внутриклеточной терапии воспалительных процессов слизистой оболочки и кожных резанных и ожоговых ран.
Цель изобретения - повышение лечебной эффективности
препарата изготовленного из фракций, из «долей» «хлебов»,амниотической жидкости и полученных методами гомогенизации, фильтрации, обладающего бактерицидным свойством, приводящим к гибели грамположительные, грамотрицательные вирусные микроорганизмы и патогенные грибы.
Поставленная цель достигается тем, что из формулы амниотическую жидкость извлекают у коров из матки с 4-5месячной стельностью. В этот период в амниотическойжидкости в «долях» и «хлебах» имеется максимальное количество стволовых клеток и плацентарных ферментов:лизоцима, комплемента, пропердина, разрушающих мембраныграмм положительных (одна оболочка) грамм отрицательных(две оболочки) микроорганизмов и вирусов.
Способ получения лечебного препарата производят в следующей последовательности:
- извлекают беременную матку с плодом из брюшной полости методом лапаротомии, и орошают матку, обеззараживая ее 1:1000 раствором марганцево-кислого калия; после гистерогомии, большой кривизны стенки рога матки плодовместилища разъединяем карункулы от котиледонов проводя дифференциацию амниотической полости от аллантоисной просматриваем в амниотической просветленной жидкости наличие включений: «долей», «хлебов», зачатковых эпителиальных клеток» и т.д.).
Амниотическая жидкость в матке с 4-5 месячным плодом имеет стволовые клетки и плацентарные бактерицидного бактериостатического значения ферменты. стерильной иглой соединенной резиновым шлангом со стерильной емкостью прокалывают амниохориалъную оболочку и отсасывают амниотическую жидкость вакуумированием (первая порция). Извлекаем плавающие в амниотической жидкости «доли» и «хлеба», которые являются скоплением большого количества стволовых клеток, зачатковых эпителиальных клеток (вторая порция) «доли» и «хлеба» гомогенизируют и к гомогенату добавляют 1:1 физраствор. Каждую подученную порцию отстаивают, фильтруют через фильтры, от 10 нм до 100 нм центрифугируют при 6000 об/мин, верхний слой лечебной жидкости сливают в емкости с притертыми крышками.
Препарат представляет собой опалесцирующую жидкость светло - желтого цвета, разливают каждую фракцию во флаконы 10, 50, 100, 250 см3 , укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.
Полученный лечебный препарат испытывают на животных внутрь, подкожно, внутриматочно, наружно. Готовые жидкости препарата используют для приготовления мазей путем механического смешивания 10%, 30% с вазелином, ланолином, глицерином для лечения болезни влагалища, шейки матки, матки у коров с послеродовыми заболеваниями.
Практическое испытание предлагаемого препарата
Полученный и изготовленный в виде жидкостей и мазей препарат проверяют на лабораторных животных (мыши, крысы, кошки, кролики) на сельскохозяйственных животных (новорожденных телятах, коровы с послеродовыми болезнями (половых
30
органов) на безвредность, токсичность, стерильность, эмбрионотоксичность, бактерицидность, фунгицидность, на раздражимость слизистых оболочек послеродовой матки у коров. Содержание гемолитического лизоцима, комплимента, пропердина мы изучали определяя их количество в получаемых фракциях и была определена бактерицидная их активность (таблица 1).
Таблица 1 – Бактерицидная активность пропердина,
комплемента, лизоцима
| Фермент | Возраст плода мес. | Процент бактерицидной |
|---|---|---|
| Пропердин | 3 | 4,8 |
| Пропердин | 5 | 11,0 |
| Комплемент | 3 | 42,84±9.10 |
| Комплемент | 5 | 87,74±11.90 |
| Лизоцим | 3 | 6,87±5,9 |
Из таблицы 1 видно что бактерицидная активность пропердина, комплемента, лизоцима, резко увеличивается к 4-5 месячному срока стельности коров. Поэтому использование фракций из амниотической жидкости и ее включений взятых в первой половине стельности является своевременным и целесообразным обладающим бактерицидными свойствами. К 5 месяцам стельности по сравнению с 3-х месячной стельностью увеличилась бактерицидная активность пропердина на 29,1%, комплемента на 104,8%, лизоцима на 48,4%.
При определении токсичности лечебного жидкого препарата г после его выпаивания мышам круглосуточно в течении 30 дней отражено в таблице 2.
Таблица 2 – Изучение острой токсичности амниотического препарата
| Испытуемые соединения, жидкости | Количество животных в группе | Доза мл | Погибло/выжило |
|---|---|---|---|
| Амниотический препарат | 5 | 150 | 0/5 |
| ПДЭ | 5 | 100 | 0/5 |
| L(Zd)=600,0 | 5 | 200 | 4/1 |
