животных, позволяющих познать особенности уникальных материнско-плодных взаимоотношений на разных стадиях беременности и при ее патологии, дать теоретическое обоснование и разработать более совершенные методы контроля за течением беременности, профилактики акушерской патологии, и, тем самым, повысить плодовитость животных и жизнеспособность получаемого приплода.
Во многих научных работах показано, что снижение оплодотворяемости животных, повышение эмбриональной смертности, осложнения беременности, влекущие за собой нарушение внутриутробного развития, рождение нежизнеспособного приплода, нарушение течения родового акта и послеродового периода у родильниц является следствием нарушения иммунологических взаимоотношений в системе мать-плод (Говалло В.И., 1987; Баргесян О.К., Сотникова Н.Ю., 1989; Соколовская И.И., 1994; Третьяков С.В., 1999; Зуев А.А., 2000).
Результаты наших исследований подтверждают литературные данные о взаимосвязи иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции коров.
Анализ результатов проведенных исследований продемонстрировал, что высокая иммунобиологическая реактивность организма коров в период их осеменения обеспечивает нормальное течение процессов оплодотворения и иммунотрофическое взаимодействие со сформировавшимся зародышем. Оплодотворенная яйцеклетка является соединением белков с различными антигенными свойствами. Известно, что сперматозоиды самцов, введенные в организм, вызывают иммунный ответ клеточного и гуморального характера. Однако в природе, несмотря на иммунологическую несовместимость матери и плода, происходит нормальный процесс роста и развития плода в утробе матери на всем протяжении плодоношения.
В крови оплодотворившихся коров, по сравнению с неоплодотворившимися, на 1-3-й день после осеменения было выше количество лейкоцитов на 6,1 % (7,96 ± 0,13 против 7,50 ± 0,04 тыс./мкл, Р<0,001), процентное содержание Т-лимфоцитов – на 21,8 % (42,4 ± 0,92 против 34,8 ± 1,14%, Р<0,001), уровень Т-хелперов – на 12,9 % (26,2 ± 0,95 против 23,2 ± 1,04 %), Р<0,05), а у Т-супрессоров отмечено снижение – на 31,7 % (11,2 ± 0,77 против 16,4±1,18 %, Р<0,001). Уровень В-лимфоцитов в крови оплодотворившихся коров оказался ниже на 14,6%, чем у неоплодотворившихся (24,6±0,83 против
28,8±1,24%, Р<0,01). Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов и циркулирующих иммунных комплексов в крови животных обеих групп находились примерно на одном уровне.
Периоду имплантации у оплодотворившихся животных свойственно снижение показателей неспецифической резистентности (количества лейкоцитов на 11,5 % (с 7,96 ± 0,13 до 7,14 ± 0,09 тыс./мкл, Р<0,001), процентное содержание Т-лимфоцитов – на 5,5 % (с 42,4 ± 0,92 до 40,2 ± 0,52, Р<0,05), Т-хелперов – на 10,1 % (26,2 ± 0,95 до 23,8 ± 0,52 %, Р<0,05), фагоцитарной активности нейтрофилов крови с 50,2 ± 0,77 до 47,6 ± 0,83 % (на 5,5 %, Р<0,05) и уровня ЦИК – на 7,1 % ( с 115,8 ± 0,77 до 113,2 ± 1,53 усл.ед., Р<0,001)), связанное, по-видимому с действием иммунодепрессивных факторов, вырабатываемых зародышем при беременности.
У неоплодотворившихся коров к периоду имплантации, напротив, отмечалась активизация защитных сил организма (повышение количества лейкоцитов на 5,1 % (с 7,50 ± 0,04 до 7,90 ± 0,11 %, Р<0,001), а у лимфоцитов отмечена тенденция к снижению на 4,9 % (с 61,3 ± 1,28 до 58,4 ± 1,22 %), содержание в крови Т-лимфоцитов выше на 16,4 % (с 34,8 ± 1,14 до 41,6 ± 0,83 %, Р<0,001), к тому же отмечено более высокое содержание Т-хелперов – на 20,5 % (с 23,2 ± 1,04 до 29,2 ± 0,77 %, Р<0,001), а содержание Т-супрессоров резко снизилось – на 46,4 % (с 16,4 ± 1,18 до 11,2 ± 0,76 %, Р<0,001), количество В-лимфоцитов имело тенденцию к снижению на 14,3 % (с 28,8 ± 1,24 до 25,2 ± 1,39 %), в то время как у оплодотворившихся коров, напротив, повышалось. Фагоцитарная активность нейтрофилов крови неоплодотворившихся животных была аналогичной на уровне 1-3-го дня после осеменения, в то время как у оплодотворившихся коров, напротив, снижалась. Также было отмечено более выраженное снижение концентрации ЦИК – на 6,3 % (с 114,6± 0,92 до 107,8 ± 1,10 усл.ед., Р<0,001) против 2,3 % у оплодотворившихся коров, по всей видимости, обуславливающее высокие пренатальные потери на ранних стадиях развития зародыша.
В связи с вышеизложенным, нами выявлено, что периоду имплантации зиготы у оплодотворившихся животных наблюдалось снижение показателей иммунобиологической реактивности организма, и наиболее важным фактором, на наш взгляд, является в этот период наступление толерантности. Мы предполагаем, что такая
взаимозащита обусловлена барьерными способностями плаценты и плодных оболочек: через этот мощный барьер антитела матери не проходят в плод, что связано, по-видимому, с преобладающим влиянием Т-супрессоров, которые появляются в большом числе и препятствуют распознавающей функции Т-хелперов, а также синтезу антител либо бласттрансформации В-лимфоцитов. Эти процессы проходят под непосредственным влиянием сигналов от костномозговых клеток и вследствие регуляции со стороны гипоталамогипофизоадренокортикальной оси. Установлению толерантности в системе самка-эмбрион способствует свойство крови при беременности подавлять активность лимфоцитов, которое появляется в ходе развития продуктов оплодотворения.
Таким образом, при нормальном физиологическом развитии беременности плод находится в условиях строгой, надежной изоляции. Нарушение целостности этого барьера различного происхождения сопровождается иммунопатологическими нарушениями воспроизводительной способности самок.
Исходя из того, что высокая оплодотворяемость животных отмечается на фоне высокой иммунобиологической реактивности, нами были апробированы различные схемы применения иммуномодулятора «Полирибонат» с целью нормализации иммунобиологической реактивности и повышения оплодотворяемости коров.
В ходе проведенных исследований выяснено, что применение иммуномодулятора «Полирибонат» на 1-2-й день после осеменения оказывает выраженное влияние на уровень неспецифической резистентности и обеспечивает повышение оплодотворяемости коров в 1,28 (83,3%) раз выше, чем в контрольной группе (64,7%), что, по всей видимости, связано с повышением сенсибилизации материнского организма к антигенам плода и адекватному иммунному ответу на них, приводящих к формированию и развитию беременности. Результаты иммунологических исследований позволяют сделать заключение, что в крови оплодотворившихся коров во время имплантации, по сравнению с периодом осеменения, отмечалось увеличение количества лимфоцитов на 2,8 %, В-лимфоцитов – на 29,8 %, Т-супрессоров – на 18,6 %, снижение содержания Т-лимфоцитов – на 5,6 %, Т-хелперов – на 10,6 %, фагоцитарной активности нейтрофилов крови – на 6,2 %, ЦИК – на 1,9 % и незначительные измене-
ния в содержании лейкоцитов.
В то же время стимуляция иммунной системы матери в период имплантации зиготы (которому при нормальном развитии беременности свойственно снижение уровня неспецифической резистентности) приводит к снижению процента беременных животных в 1,4-1,5 раза. Причинами такого явления, очевидно, является значительное усиление иммунного ответа материнского организма на антигены плода, связанное с нарушением имплантации и отторжением развивающегося зародыша.
Применение полирибоната в период, предшествующий осеменению (30-35-й день после отела), не только стимулирует проявление половой цикличности у коров после отела (снижение продолжительности периода от отела до первого осеменения на 18,7 дня (70,1±4,9 против 88,3±13,5), но и создает благоприятные условия для оплодотворения, формирования и развития зародыша (снижение продолжительности бесплодия на 11,7 дней и индекса осеменения на 8,5 % (1,53 против 1,66)).
При современном ведении животноводства существенное значение приобретает применение фармакологических средств, направленно влияющих на процессы обмена веществ, усиливающих регенеративные процессы в тканях, повышающих общую резистентность организма.
Ослабление механизмов неспецифической резистентности организма животных, нарушение обменных процессов, активизация условно патогенной микрофлоры являются основополагающими факторами в патогенезе послеродовых заболеваний животных.
Воспалительные процессы в половых органах сопровождаются вторичным иммунодефицитным состоянием, неотъемлемым компонентом которого является недостаточность клеточных и гуморальных факторов неспецифической защиты организма животных.
В этой связи в последнее время все большее внимание уделяется изысканию и совершенствованию средств, направленных на повышение защитных сил организма при болезнях половых органов, включая применение комплексных препаратов различного происхождения, в качестве стимуляторов и модуляторов специфического и неспецифического иммунитета.
По нашему мнению, нарушение половых функций у коров разви-
вается на фоне снижения иммунобиологической реактивности организма стельных животных. В связи с этим, с целью профилактики нами были применены: «Нитамин» (водорастворимый комплекс витаминов А, Д3, Е и С) и «Полирибонат» (иммуномодулятор). Известно, что витамины не только предупреждают гипо- и авитаминозное состояние, но и повышают иммунобиологические свойства организма. При длительной и резко выраженной недостаточности в витаминах нарушается сперматогенез, овогенез, особенно при недостатке витаминов группы А, В, Е, что нередко приводит к бесплодию. Большое влияние оказывают витамины на процесс имплантации зиготы и эмбриональный период развития плода. При недостатке их, особенно витамина Е, оплодотворенное яйцо имплантируется, но на 11-13-й день беременности часто подвергается резорбции. Недостаток витаминов нарушает процессы развития эмбриона и ведет к гибели.
Регуляция обмена витаминов в организме происходит при взаимодействии их с гормонами. Витамины и гормоны нормализуют интерорецептивные и афферентные реакции, обеспечивая этим ведущую роль центральной нервной системы в регулировании всех видов обмена веществ. У животных при авитаминозе нарушается процесс фолликулогенеза и вследствие этого происходят атрофические явления функциональных структур эндометрия.
Витамины, гормоны, ферменты представляют единую систему биологических катализаторов, без которых не могут происходить важнейшие обменные процессы в организме.
Изучение влияния нитамина и полирибоната на уровень неспецифической резистентности и характер течения родов и послеродового периода у коров показало, что применение их в предродовой период нормализует процессы обмена веществ беременных животных. У животных опытной группы наблюдалось увеличение уровня кальция и снижение уровня фосфора в сыворотке крови до 4,98±0,25 мкг% (Р<0,02 ), но их соотношение остается в норме 2:1. Увеличился уровень сахара в крови животных до 41,4±2,30 мг%, резервной щелочности до 51±1,72 об%СО2 (Р<0,02), что соответствует норме. Статистически достоверно повысилось содержание каротина в крови до 0,366±0,02 мг%, что, по нашему мнению, способствует более полноценной подготовке к отелу и активизации защитных сил организма в послеродовом периоде.
Комплексное применение нитамина и полирибоната повлияло и на уровень иммунологических показателей крови. Полученные данные показывают, что перед родами повысилось содержание лейкоцитов, в опытной группе повышение было более выраженным, составило 18,4% (с 5,62±0,34 до 6,89±0,40, Р<0,05. Процентное содержание в крови опытной группы Т-лимфоцитов составило (30,3%), что ниже на достоверно значимую величину против (37,6%) в контроле, в то же время у них отмечено более высокое содержание Т-хелперов (23,2%) против (19,3%) в контроле. Анализируя полученные данные, необходимо учитывать, что иммунологический статус перед родами изменяется, причем известно, что это связано с резким изменением гормонального статуса. Имеется значительное количество работ, показывающих отрицательную корреляцию между уровнем стероидных гормонов и Т-лимфоцитов (Баргесян О.К., Сотникова Н.Ю., 1989; Зуев А.А., 2000; Багманов М.А., Мухаметгалиев Р.Н., 2001).
Резкое снижение супрессорных клеток перед и во время родов может быть обусловлено различными механизмами. Предполагают, что к моменту родов происходит перераспределение регуляторных субпопуляций лимфоидных клеток с поступлением части Т-хелперов из периферической циркуляции в иммунокомпетентные органы и плаценту. Возможно также, что этот феномен связан с маскировкой поверхностных рецепторов клеток и потерей ими супрессорной функции (Соколовская И.И., 1994; Третьяков С.В., 1999).
Литературные данные показывают, что при беременности отмечается снижение клеточного иммунитета матери. С помощью количественных и функциональных методов оценки Т-лимфоцитов было показано, что у беременных животных увеличивается число Т-супрессоров. Большой интерес представляют данные об изменении количества Т-супрессоров в разные сроки нормально протекающей беременности, в родах и послеродовом периоде. Установлено, что в первом и втором триместре беременности происходит снижение как абсолютного, так и относительного числа Т-лимфоцитов, в то время как в третьем триместре количество этих клеток достоверно возрастает и существенно не отличается от контроля. Причем разница между первым и вторым триместром также статистически значима. Значительное повышение уровня Т-супрессоров во
