Микропипеткой5 набирают точно 0,1 мл исследуемой= спермы и смешивают с раствором лимоннокислого натрия в es из флаконов, разбавляя таким образом ау Te Past) итетку несколько зразипромывают раствором из этого флакона, чтобы в ней не остались спермии. Разбавленную сперму вливают в кювету фотоэлект; роколориметра с рабочей длиной 10 мм, перемешивают ть 4 ee = . в неи сперму еще раз стеклянной палочкой и ставят в правое гнездо прибора на расстоянии, наиболее удаленном от фотоэлемента. В левое гнездо прибора ставят такую же кювету, наполненную раствором лимоннокислого натрия без добавки спермы. Затем шкалу отсчета оптической плотности левого барабана устанавливают на нуль и, вращая фотометрические клинья, переводят па нуль стрелку гальванометра вначале грубой настройкой (рис. 43) (регулятором № 1), а затем точной настройкой (регулятором № 2). После этого вынимают кювету со спермой из правого гнезда и ставят вместо нее кювету с раствором лимоннокислого натрия. Стрелка гальванометра при этом отклоняется, и ее ставят на нуль, поворачивая левый барабан.
15]
На красной шкале этого барабана читают показатель оптической мутности. Каждые 0,05 деления шкалы соответствуют концентрации спермиев, определяемой по rpaдуировочной кривой, которую выводят ежемесячно, обязательно отдельно для каждого прибора. Задание 9. Определить концентрацию‘ спермиев в сперме жеребца по стандартам. т
р
Материалы и оборудование: свежеполученная сперма жеребца; стандарты спермы жеребца; стеклянная палочка; марлевые ты для определения концентрации спермы жеребца представляют собой одинакового диаметра запаянные пробнркн с жидкостью, имитирующей неразбавленную сперму в концентрации 10, 50, 100, 200, 300 и 500 млн. спермиев в [| мл.
Ход работы. Сперму наливают в чистую пустую пробирку точно такого диаметра, как и стандарты, и сравнивают с ними. Предварительно стандартные пробирки хорошо встряхивают, чтобы осевшие частицы равномерно распределились. Пробирки просматривают на свет, подбирая стандарт, наиболее близкий к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермы может быть определена и как промежуточная между двумя стандартами, например 75 млн. (среднее между 50 и 100 млн.). При концентрации спермиев более 500 млн. в 1 мл исследуемую сперму можно разбавить глюкозным разбавителем в два раза (1:1), затем установить концентрацию по стандартам, а результат определения удвоить, Задание 10. Определить переживаемость спермиев. Показатель подвижности (активность движения) спермиев очень важен в первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермии с активным прямолинейно поступательным движением, непригодна для оплодотворения. Тем не менее хорошая подвижность спермиев в только что полученной сперме еще не дает достаточного основания для окончательной оценки оплодотворяющей способности, так как движение спермиев может быстро прекратиться. Продолжительность жизпи спермиев вие организма является важным косвенным показателем в оценке оплодотворяющей способности спермы производителя. Чем дольше спермии в пробирке сохраняют способность двигаться, тем больше вероятность оплодотворения матки такой спермой. Переживаемость спермиев характеризу-
152
ется также их устойчивостью к внешним воздействиям. Эта’ устойчивость зависит от нормального протекания спермиогенеза и степени зрелости спермиев. При плохом кормлении, уходе и содержании самца, чрезмерной половой нагрузке и т. д. переживаемость спермиев ухудшается и самки, осемененные такой спермой, не оплодотворяются. Переживаемость спермиев также снижается при резком охлаждении спермы, при попадании в нее воды, медикаментов, грязи.
Мате риа а бо Deo SENN сперма, разбавитель (синтетическая среда), пробирки емкостью 3—4 мл и емкостью 7— 8 мл или флаконы из-под пенициллина; термос; лед; мешочек из непромокаемой пленки; пипетки На на 1—2 и 510 мл; штативы; стеклянные падонки: a eS стекла; микроскопы; перым статы для микроскопов; 3%-ный раствор лимоннокислого натрия. Ход работы. Сперму быка или барана, разбавленную в 8 и 16 раз глюкозо-желточно-цитратным разбавителем или какой-либо другой синтетической средой, наливают в небольшом количестве (0,5—1 мл) в чистые пробирки емкостью 3—4 мл или в пенициллиновые флаKOHBI. Сперму жеребцов разбавляют в 4 раза (1:3) глюкозным или глюкозо-желточным разбавителем и наливают по 4 мл в пробирки емкостью. 7—8 мл. Сперму хряков и кроликов также разбавляют в 4 раза одним из разбавителей для спермы (см. ниже). Пробирки (флаконы) закрывают пробками (корковыми или ватными) и выдерживают при комнатной температуре: пробирки с разбавленной спермой барана и быка —45—50 минут, а жеребца и хряка — 15—20 минут. Опускать пробирки в холодную воду нельзя. Затем пробирки помещают в специальный круглый штатив, который ставят на дно термоса для постепенного охлаждения спермы до O°. Сперму хряка и быка, если она разбавлена специальными средами, можно хранить прин комнатной темиературе.
Подвижность спермиев быка, барана, хряка и кролика контролируют через каждые 24—48 часов, а спермиев жеребца через каждые 12—24 часа, пока’ окончательно не прекратится движение всех спермиев. Активность движения спермиев из охлажденной спермы оценивают обязательно при температуре 40°, причем нагревают до такой температуры только исследуемую каплю, а не всю пробирку со спермой.
153
