Глава V1 Разбавление, хранение LS ee иeeтранспортировкаee ee АИС.спермыо
Разбавление спермы. Чтобы увеличить объем эякулята, а также для того, чтобы сохранить оплодотворяющую способность спермиев на более длительный срок, при хранении их вне организма сперму разбавляют специальными средами.
Для сохранения спермы вне организма нужно создавать условия, которые тормозили бы расходование внутренних энергетических запасов в спермиях и не вызывали их гибель. Разбавители должны иметь определенные физико-химические свойства и такую концентрацию составных частей, при которой осмотическое давление было бы наиболее благоприятным для жизнеспособности спермиев, того или иного вида животных. Поэтому следует точно отвешивать вещества в соответствии: с рецептом разбавителя и готовить его на прокипяченной дистиллирован- — ной воде, чтобы получить нужное осмотическое давление_ среды. При составлении рецептов разбавителей ладо учитывать также, что спермии сохраняют жизнеспособпость только в определенных пределах кислотности (концентрации водородных ионов). Следовательно, в разбавители могут входить лишь в незначительных количествах. слабые кислоты и щелочи. Разбавители не должны содержать солей многовалентных металлов (свинца, олова и др.), а также ядовитых и пахучих веществ, губительно действующих на спермиев. Для приготовления сред нужно брать химически чистые реактивы. Кроме того, они должны быть вполне доброкачественными, иметь соответствующий ГОСТ. В разбавители вводят сахара (неэлектролиты): глюкозу, лактозу и др. Сахара можно заменять гликоко| лом (аминоуксусная кислота), медом. Сахара ниспользуются. спермиями дляу дыхания и гликолиза. : р Разбавитель должен устранять или ослаблять температурный шок (холодовый удар) спермиев. Для этого
160
=
р ам в состав разбавителей введен желток куриного яйца, поя устойчивость спермиев к резкому охлажмолочнаяВ спермекислота;барана желтокили быкакуриногопри хранениияйца, образуетсявводимый в разбавитель, имеет реакцию более кислую, чем сперма (pH 6,2). Естественная буферная способность спермы He может полностью нейтрализовать образующуюся молочную кислоту и кислотность желтка куриного яйца. Поэтому в состав разбавителей спермы быка и барана нужно вводить лимоннокислый натрий (цитрат), являющийся буфером и имеющий несколько щелочную реакцию (рН 7,8—8,0); он нейтрализует излишнюю кислотность.
В целях понижения содержания в сперме ионов кальция и магния в состав некоторых синтетических сред для разбавления спермы, например, хряка вводят двунатриевую.соль этилендиаминтетрауксусной кислоты {син.хелатон, ЭДТА, трилон-Б), которая, связывая ионы металлов, тормозит активность ферментов и понижает обмен веществ в спермиях, сохраняемых при комнатной температуре.
Для предупреждения развития микроорганизмов в сохраняемой сперме в разбавители добавляют антибиотики и сульфаниламидные препараты (стрептомицин, пенициллин и белый стрептоцид или спермосан-3) B дозах, указанных в действующих инструкциях по искусственному осеменению (санация спермы). ‚ В. К. Милованов (1962) предложил различать 3 класса синтетических сред, или разбавителей, спермы в зависимости от их состава и назначения: класс А — экстендоры (от латинского «экстендо»— увеличивать, расширять); это сахарно-солевые растворы, применяемые для разбавления спермы с целью увеPL CHM sas объема, но без охлаждения, хранения и он ‚(глюкозо-фосфатные, глюкозные идр.); 4 08 5 — протекторы (защитные среды); представОН in AEE DEH, HO © MUATETOW ne веко Pee Cae COO) FINES SCL CREEL PAE STTSE редохраняюниSLMS LE) Oy ROTO AOROLS ударадиристаиль физации ити ве мораживанияви и, д, класс В — имплементоры (оснащенные), те же эксчендоры или протекторы, но к ним добавлены специальные вещества, воздействующие на органы размножения
6 Г.В, Паршутин и др. 161
самок при осеменении, например ферменты (муциназа) нейротропные (прозерин, карбахолин), гормональные (окситоцин, питуитрин) и другие вещества; муциназа — фермент, разжижающий слизь в шейке матки и способствующий, таким образом, продвижению спермиев. Гормональные и нейротропные ‘препараты вызывают усиление сокращения матки. Приготовление разбавителей (общие положения). Вся посуда для приготовления разбавителя, а также стеклянные палочки, пипетки, термометр для измерения температуры в разбавителе должны быть чистыми и простерилизованными. Мензурки и банки с разбавителем и разбавленной спермой закрывают стерильными крышками или полиэтиленовыми салфетками. Разбавители по рецептуре довольно разнообразны, что зависит от вида животного и способа хранения разбавленной спермы. Готовят разбавители непосредственно перед получением спермы от производителей, с тем чтобы от времени приготовления до момента использования проходило не более 3—4 часов. В стерильный сосуд (колбу) высыпают точно отвешенные в соответствии с рецептом глюкозу и другие веществаВают необходимое(кроме желтка,количествоглицеринадистиллированнойи антибиотиков),водывлии размешивают покачиванием колбы до полного растворения препаратов. Если нет растворимого белого стрептоцида, а имеется слаборастворимый, то его нужно перр оби титьСалЬни FS высыпать в, коло В 3 КОЛИНЕСЦВОМпОрячен дистиллированной ae ener среду кипятят в течение 5—7 минут в водяной бане 1 Ее 40—45°. Куриные яйца для получения желтка обрабатывают следующим образом: тщательно моют их щеткой, протирают сверху спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги. Держа листок в левой руке, перекатывают желток на бумаге, чтобы подсушить его поверхность. Остатки белка впитываются в бумагу. Освободив желток от белка, стерильным скальпелем делают прокол сбоку в пленке желтка и сливают желток в стерильную мензурку; левой рукой держат за края фильтровальную бумагу с желтком, а пальцами правой руки поглаживают
162
