ческое замерзание оказывает меньшее повреждающее,
действие на спермиев. Техника замораживания спермы быков при двухмоментном разбавлении ее и трехступенчатом замораживании сводится к следующему: сперму разбавляют 1:4 или 1:9 глюкозо-желточно-цитратной средой и охлаждают до +5°. Через 3 часа ее вторично разводят той же средой, содержащей 16% глицерина. Затем ее выдерживают 12—15 часов при 2+5° для уравновешивания глицерина со спермой. После этого запаянные ампулы со спермой замораживают в специальном аппарате (АХК-4) до — 79°, а затем быстро переносят в емкости с жидким азотом (— 196°). В настоящее время слособ медленного замораживания спермы быков; уступает более производительному быстрому замораживанию, при котором глубокое охлаждение спермы в форме гранул до температуры жидкого азота (— 196°) достигается в течение нескольких минут, В результате удается лучше сохранять структуру спермиев, получать относительно высокую активность семени после оттаивания. Перед замораживанием сперму одномоментно разбавляют (1:1 или 1:10) средой: вода дистиллированная— 100 мл, глюкоза— 4,5 г, цитрат натрия —2,1 г, желток —20 г, глицерин— 10 мл. После этого сперму охлаждают при +5, +2° в течение 4—6 часов и расфасовывают по 0,1—1 мл на охлажденную пластину из полимерного`материала (фторопласт) или сухого льда, в которых сделаны лунки на 0,1—1 мл. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота в течение 1,5—2 минут, затем | па несколько секунд погружают ее в жидкий азот. После этого гранулы спермы собирают, помещают в чашки | или контейнеры и переносят на хранение в сосуды Дьюара с жидким азотом (рис. 46). Ф. И. Осташко (1972) рекомендует готовить облицованные гранулы: разбавленную сперму разливают в тонкие полиэтиленовые трубки (из пленки), затем перед замораживанием трубки пережимают в пакетики по 0,2 мл спермы. Рекомендуется также замораживать сперму быка в ампулах или капиллярах (пайеттах— полистироловые или пропиленовые трубочки длиной 140 мм, с внутренним диаметром 2 мм и наружным— 5 мм) в токе холодного газообразного азота. В этом случае пакеты с ампулами или капиллярами после охлаждения до +5, +2° опускают
169
@ ВЕ = : Рис. 46. Сосуд Дьюара: 5 внешний вид и схема, Е. “2гы | ед | |fi КИ| Е в Lif | \ | / ЕЕ| i| F НИ : | ! Hit р hit We | м Чи ee iin SR в течение 5—6 часов на подставке в сосуд Дьюара с жидким азотом до соприкосновения с его поверхностью на 3 минуты, где происходит замораживание SINQDSLEL100°, а затем1 2SO}MOABECONSпереносятTEESE)наонохранение|“MEMLILESDELY|Drf CEHв верхниеУ секцииEO хранилища над жидким азотом. Необходимо следить, | чтобы в хранилище был жидкий азот; количество его нужно периодически контролировать с помошью мерной° линеики и по мере испарения пополнять не менее чем до 5 общего объема (см. ниже). После замораживания оттанвают несколько ампул, капилляров или гранулр и проверяют активность; спермы. Для дальнейшего хранения в замороженном состоянии допускают сперму, имеющую активность не ниже 4 баллов ae 4 Сперму разных быков с учетом их породности хранят в стационарном хранилище в отведенных для них секциях. Замораживание спермы жеребцов. Применяют ту же - бавлениемметодику р быстрогоспермы охлаждениясредой:oe водас одномоментнымAUK : IU DORA!раз-д глицерин100 мл, лактоза— 3,5 мл —11(Е. г,М.желтокПлатов,куриного1973). Разбавленнуюяйца— 0,8 г, сперму 1:3—1:4 разливают по 10—20 мл в алюминиевые паветьЕ и ваораживают2 BP EIESь BAVA SUNSETI ВВС (1—2 см от поверхности). Для этих целей предложен И разбавитель другого состава: вода дистиллирован170
— | | 1
ная — 100 мл, лактоза — 11 г, хелатон — 0,1 г, 4,2% -ный раствор бикарбоната натрия — 0,2 мл, 35,7%-ный расяйца— 1,6—2 г; глицерин твор цитрата натрия — 0,25— 3,5 млмл,(Р.желтокК. Романькова,куриного 1972). Замораживание спермы хряка и барана. В последнее время разработаны разбавители и техника замораживания спермы хрякаи барана; они аналогичны вышеизложенным, но результаты пока практическогомости. значения. не имеют из-за невысокого процента оплодотворяеМеры личной безопасности. Персонал, работающий © сосудами Дьюара (заливка жидкого азота, загрузка п выгрузка канистр со спермой, опорожнение сосуда и так далее), обязан надевать защитные очки (лучше щитки из органического стекла) и кожаные рукавицы или перчатки. Одежда не должна оставлять открытым кожный покров, так как попадание жидкого азота на кожу может вызвать ожоги. Особенно необходимо избегать соприкосновения открытых участков тела с металлическими предметами, извлеченными из жидкого азота: они могут вызвать обморожения. Брюки должны быть без манжет и закрывать верх обуви. Асбестовые, кожаные или брезентовые рукавицы должны надеваться на руки свободно, чтобы при необходимости их можно было легко сбросить. При попадании жидкого азота на незащищенный участок тела его следует немедленно обмыть водой, я A х Заливать жидкий азот в теплый сосуд Дьюара (имеющий температуру внутри сосуда, равную температуре окружающего воздуха) надо медленно. Если заливка ведется через гибкий шланг диаметром 40 мм, давление в транспортном резервуаре (по манометру) должно быть не более 0,5 атм. Если азот заливается из другого сосуда Дьюара, то эта процедура должна производиться через широкую металлическую воронку мелкими порциями с паузами 5—7 секунд. В процессе заливки теплого сосуда категорически запрещается заглядывать в горловину сосуда для определения высоты уровня жидкости. Быстрое заполнение теплого сосуда Дыоара азотом приводит к выбросам жидкости из сосуда вследствие чрезмерно большого количества образующихся паров (особенно у сосудов с узкой горловиной). „Помещение, в котором находятся сосуды Дьюара (в том числе и стационарные хранилища спермы) с жидким азотом, должно быть оборудовано приточно-вытяжной естественной или принудительной вентиляцией. В процессе заливки сосудов жидким азотом необходимо использовать все возможности для интенсивного проветривания помсщения. Следует помнить, что пребывание в помещении с повышенной кружение).щенииpa LTSпри заливкеОсобенноазотаиливызываетрезкоопорожненииповышаетсяголовнуюсосудов.концентрациябольЕсли(а иногдасодержаниеазотаи вголово-поме-кислородакаких-либов помёщениипредварительныхснизитсясимптомов,до 16%, человекнапримертеряетголовокружения.сознание без Рядом с помещениями, где возможно повышенное содержание в воздухеговые азота,противогазы.LOWKIL ПринаходитьсяпоявленииисправныесимптомовизолирующиеобморочногоNAMсостоя-шланиня пострадавшего необходимо вывести из помещения на свежий воздух.
| | | | | || | |
