р ам в состав разбавителей введен желток куриного яйца, поя устойчивость спермиев к резкому охлажмолочнаяВ спермекислота;барана желтокили быкакуриногопри хранениияйца, образуетсявводимый в разбавитель, имеет реакцию более кислую, чем сперма (pH 6,2). Естественная буферная способность спермы He может полностью нейтрализовать образующуюся молочную кислоту и кислотность желтка куриного яйца. Поэтому в состав разбавителей спермы быка и барана нужно вводить лимоннокислый натрий (цитрат), являющийся буфером и имеющий несколько щелочную реакцию (рН 7,8—8,0); он нейтрализует излишнюю кислотность.
В целях понижения содержания в сперме ионов кальция и магния в состав некоторых синтетических сред для разбавления спермы, например, хряка вводят двунатриевую.соль этилендиаминтетрауксусной кислоты {син.хелатон, ЭДТА, трилон-Б), которая, связывая ионы металлов, тормозит активность ферментов и понижает обмен веществ в спермиях, сохраняемых при комнатной температуре.
Для предупреждения развития микроорганизмов в сохраняемой сперме в разбавители добавляют антибиотики и сульфаниламидные препараты (стрептомицин, пенициллин и белый стрептоцид или спермосан-3) B дозах, указанных в действующих инструкциях по искусственному осеменению (санация спермы). ‚ В. К. Милованов (1962) предложил различать 3 класса синтетических сред, или разбавителей, спермы в зависимости от их состава и назначения: класс А — экстендоры (от латинского «экстендо»— увеличивать, расширять); это сахарно-солевые растворы, применяемые для разбавления спермы с целью увеPL CHM sas объема, но без охлаждения, хранения и он ‚(глюкозо-фосфатные, глюкозные идр.); 4 08 5 — протекторы (защитные среды); представОН in AEE DEH, HO © MUATETOW ne веко Pee Cae COO) FINES SCL CREEL PAE STTSE редохраняюниSLMS LE) Oy ROTO AOROLS ударадиристаиль физации ити ве мораживанияви и, д, класс В — имплементоры (оснащенные), те же эксчендоры или протекторы, но к ним добавлены специальные вещества, воздействующие на органы размножения
6 Г.В, Паршутин и др. 161
самок при осеменении, например ферменты (муциназа) нейротропные (прозерин, карбахолин), гормональные (окситоцин, питуитрин) и другие вещества; муциназа — фермент, разжижающий слизь в шейке матки и способствующий, таким образом, продвижению спермиев. Гормональные и нейротропные ‘препараты вызывают усиление сокращения матки. Приготовление разбавителей (общие положения). Вся посуда для приготовления разбавителя, а также стеклянные палочки, пипетки, термометр для измерения температуры в разбавителе должны быть чистыми и простерилизованными. Мензурки и банки с разбавителем и разбавленной спермой закрывают стерильными крышками или полиэтиленовыми салфетками. Разбавители по рецептуре довольно разнообразны, что зависит от вида животного и способа хранения разбавленной спермы. Готовят разбавители непосредственно перед получением спермы от производителей, с тем чтобы от времени приготовления до момента использования проходило не более 3—4 часов. В стерильный сосуд (колбу) высыпают точно отвешенные в соответствии с рецептом глюкозу и другие веществаВают необходимое(кроме желтка,количествоглицеринадистиллированнойи антибиотиков),водывлии размешивают покачиванием колбы до полного растворения препаратов. Если нет растворимого белого стрептоцида, а имеется слаборастворимый, то его нужно перр оби титьСалЬни FS высыпать в, коло В 3 КОЛИНЕСЦВОМпОрячен дистиллированной ae ener среду кипятят в течение 5—7 минут в водяной бане 1 Ее 40—45°. Куриные яйца для получения желтка обрабатывают следующим образом: тщательно моют их щеткой, протирают сверху спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги. Держа листок в левой руке, перекатывают желток на бумаге, чтобы подсушить его поверхность. Остатки белка впитываются в бумагу. Освободив желток от белка, стерильным скальпелем делают прокол сбоку в пленке желтка и сливают желток в стерильную мензурку; левой рукой держат за края фильтровальную бумагу с желтком, а пальцами правой руки поглаживают
162
фильтр снаружи к месту прокола. На фильтре остается только тонкая пленка. Желток куриного яйца, антибиотики или спермосан-3 и глицерин добавляют в среду, когда ее температура будет не выше 45°. Для приготовления молочного разбавителя берут свежевыдоенное от здоровой коровы или кобылы молоко и процеживают его через чистую марлю в стеклянную или эмалированную посуду и подогревают до кипения; снова процеживают через стерильную марлю и охлаждают до 30—35°. Затем в молоко добавляют желток куриного яйца, антибиотики и белый стрептоцид в тех же количествах, что и в синтетические среды. Если сперму, разбавленную молоком, не собираются хранить, то желток можно не добавлять. При нагревании, чтобы молоко не выпаривалось, посуду следует накрывать. Можно также использовать сухое полужирное молоко (10 г на 100 мл дистиллированной воды; кипятят до растворения сухого молока). Разбавление спермы. Сперму нужно разбавлять не позже чем через 5—10 минут после ее получения в искусственную вагину. При разбавлении необходимо соблюде ро ДОсторожTO Ch дакАкак CHS BMH Cou CHE) тувствительны к изменению условий среды. Разбавитель м И Tyne auer. Ran БИ noted 35°. Bue м =. и УДО Goo hale) 0 SPECIE TUNES: ную сперму постепенно охлаждают к моменту разбавления до такой же температуры, что и разбавитель. В измеренное количество спермы медленно, тонкой струйкой вливают нужный объем разбавителя. При таком способе состав среды будет изменяться постепенно. Чтобы убедиться в том, что разбавление не снизило качество спермы, каплю разбавленной спермы просматривают под микроскопом. Если оценка по подвижности спермиев резко снизилась, то разбавленную сперму бракуют, а разбавитель готовят снова. Биологический контроль компонентов разбавителей производится при поступлении на станцию или пункт искусственного осеменения новых партий антибиотиков, сульфаниламидов, глюкозы, лактозы и других веществ, входящих в состав среды. Токсичность или безвредность препаратов среды определяют по показателю выживаемости в ней спермиев (балл/ч), т. е. по времени хранения (ч), при котором 6* 163
