и резиновые мешочки. При хранении спермы в холодильнике необходимо проверить, чтобы температура в нем равнялась +2, +4°. Сроки хранения разбавленной спермы при 0-14° ограничены. Сперму быка и хряка хранят не более трех суток; жеребца— двое суток; барана— сутки или 1,5 суток. Подвижность спермиев при осеменепии должна быть не меньше (соответственно) 7—6—5—8 баллов. Хранение спермы в замороженном состоянии. Во время хранения обменные процессы в сперме при кислотном анабиозе, а также при температуре 0+4° хотя и значительно снижены, но все же протекают на довольно заметном уровне. Спермии расходуют питательные вещества, отравляются продуктами обмена, разрушаются и гибнут. В результате оплодотворяющая способность их при хранении спермы ограничена несколькими сутками. Более глубокий анабиоз с почти полным прекращением обменных процессов достигается замораживанием спермы при низких температурах (—79°, — 196°). Но первые опыты по замораживанию спермы животных показали, что спермии очень чувствительны к низким температурам, погибают при замораживании. ванииОсновной причиной гибели спермиев при заморажикристалловсчитаютльда,механическоеобразующихсяразрушающеепри охлаждениидействиекак в плазме спермы, так и в самих спермиях. Кристаллы льда наносят необратимые нарушения в структуре протоплазмы и оболочке спермия. Успешные раббты по глубокому охлаждению спермы производителей провел в 1946—1950 гг. И. В. Смирнов. Он замораживал сперму в жидком кислороде и твердой двуокиси углерода (сухой лед) и получил крольчат, а затем ягнят и телят от самок, осемененных оттаянной спермой. В дальнейшем над совершенствованием метода замораживания спермы быков работали многие советские и зарубежные ученые (Ф. Н. Осташко, Полдж, Роусон, Паркс и др.). Для разбавления спермы перед замораживанием применяли среды, содержащие глицерин. Вкристаллысперме прильдазамораживанииобразуют формув присутствиилистьев папоротникаглицерина и оставляют каналы, в которых размещаются спермии. Одновременно глицерин задерживает начало кристаллизации, замедляет рост кристаллов. Мелкокристалли168 |
ческое замерзание оказывает меньшее повреждающее,
действие на спермиев. Техника замораживания спермы быков при двухмоментном разбавлении ее и трехступенчатом замораживании сводится к следующему: сперму разбавляют 1:4 или 1:9 глюкозо-желточно-цитратной средой и охлаждают до +5°. Через 3 часа ее вторично разводят той же средой, содержащей 16% глицерина. Затем ее выдерживают 12—15 часов при 2+5° для уравновешивания глицерина со спермой. После этого запаянные ампулы со спермой замораживают в специальном аппарате (АХК-4) до — 79°, а затем быстро переносят в емкости с жидким азотом (— 196°). В настоящее время слособ медленного замораживания спермы быков; уступает более производительному быстрому замораживанию, при котором глубокое охлаждение спермы в форме гранул до температуры жидкого азота (— 196°) достигается в течение нескольких минут, В результате удается лучше сохранять структуру спермиев, получать относительно высокую активность семени после оттаивания. Перед замораживанием сперму одномоментно разбавляют (1:1 или 1:10) средой: вода дистиллированная— 100 мл, глюкоза— 4,5 г, цитрат натрия —2,1 г, желток —20 г, глицерин— 10 мл. После этого сперму охлаждают при +5, +2° в течение 4—6 часов и расфасовывают по 0,1—1 мл на охлажденную пластину из полимерного`материала (фторопласт) или сухого льда, в которых сделаны лунки на 0,1—1 мл. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота в течение 1,5—2 минут, затем | па несколько секунд погружают ее в жидкий азот. После этого гранулы спермы собирают, помещают в чашки | или контейнеры и переносят на хранение в сосуды Дьюара с жидким азотом (рис. 46). Ф. И. Осташко (1972) рекомендует готовить облицованные гранулы: разбавленную сперму разливают в тонкие полиэтиленовые трубки (из пленки), затем перед замораживанием трубки пережимают в пакетики по 0,2 мл спермы. Рекомендуется также замораживать сперму быка в ампулах или капиллярах (пайеттах— полистироловые или пропиленовые трубочки длиной 140 мм, с внутренним диаметром 2 мм и наружным— 5 мм) в токе холодного газообразного азота. В этом случае пакеты с ампулами или капиллярами после охлаждения до +5, +2° опускают
169
@ ВЕ = : Рис. 46. Сосуд Дьюара: 5 внешний вид и схема, Е. “2гы | ед | |fi КИ| Е в Lif | \ | / ЕЕ| i| F НИ : | ! Hit р hit We | м Чи ee iin SR в течение 5—6 часов на подставке в сосуд Дьюара с жидким азотом до соприкосновения с его поверхностью на 3 минуты, где происходит замораживание SINQDSLEL100°, а затем1 2SO}MOABECONSпереносятTEESE)наонохранение|“MEMLILESDELY|Drf CEHв верхниеУ секцииEO хранилища над жидким азотом. Необходимо следить, | чтобы в хранилище был жидкий азот; количество его нужно периодически контролировать с помошью мерной° линеики и по мере испарения пополнять не менее чем до 5 общего объема (см. ниже). После замораживания оттанвают несколько ампул, капилляров или гранулр и проверяют активность; спермы. Для дальнейшего хранения в замороженном состоянии допускают сперму, имеющую активность не ниже 4 баллов ae 4 Сперму разных быков с учетом их породности хранят в стационарном хранилище в отведенных для них секциях. Замораживание спермы жеребцов. Применяют ту же - бавлениемметодику р быстрогоспермы охлаждениясредой:oe водас одномоментнымAUK : IU DORA!раз-д глицерин100 мл, лактоза— 3,5 мл —11(Е. г,М.желтокПлатов,куриного1973). Разбавленнуюяйца— 0,8 г, сперму 1:3—1:4 разливают по 10—20 мл в алюминиевые паветьЕ и ваораживают2 BP EIESь BAVA SUNSETI ВВС (1—2 см от поверхности). Для этих целей предложен И разбавитель другого состава: вода дистиллирован170
