При исследовании вагинальной микрофлоры якутского скота во всех пробах установлено доминирование спорообразующих аэробных бактерий рода Bacillus (до 15500 тыс. КОЕ в 1 мл слизи). У коров с нормальным отелом их количество в 9,1 раз выше, чем у коров с эндометритами. Следует отметить в вагинальном микробиоценозе якутского скота (во всех 17 пробах) отсутствие лактобактерий и присутствие бифидобактерий только у коров с нормальным отелом. Представители группы кишечной палочки присутствуют в обеих группах, но у коров с эндометритами отмечаются в большом количестве лактозоотрицательные эшерихии (до 5000 тыс. КОЕ в 1 мл слизи), к которым относятся патогенные энтеропатогены.
Данные подтверждают результаты многих исследователей, согласно которым у 70 % стельных коров до самого отела и у 80 % нормально отелившихся коров влагалище, шейка матки и матка постоянно инфицированы условно-патогенной микрофлорой. При понижении резистентности организма и нарушении слизистой оболочки репродуктивных органов условно-патогенные микроорганизмы становятся причиной воспалительных процессов в гениталиях, приводящих к потере воспроизводительной способности.
В природных условиях при естественном спаривании инфицирование происходит постоянно. Только развитие воспалительных процессов в гениталиях и нарушение воспроизводительной функции наблюдается не всегда. Это связано с тем, что половые органы самки обладают совершенным механизмом естественной защиты. Однако при понижении резистентности организма самки условно-патогенные бактерии и грибы, находящиеся в «дремлющем» состоянии в организме животного, а также в сперме быков-производителей, способны снижать оплодотворяемость, нарушать эмбриогенез (гибель эмбрионов), провоцировать аборты и воспалительные процессы в гениталиях, вызывая бесплодие.
3.4. Микологические исследования влагалищно-цервикальной слизи коров с послеродовыми эндометритами
Всего микологическим исследованиям было подвергнуто 825 проб влагалищно-цервикальной слизи и фекалий. Из них 646 проб – от коров с послеродовыми осложнениями. Идентификацию выделенных микроскопических грибов проводили при помощи «Определителя патогенных и условно-патогенных грибов» (Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди, 2001). Были выделены микроскопические грибы, отнесенные к 2 типам ( Ascomicota и Zygomicota ), 5 родам, 4 видам.
Классификация видов грибов, обнаруженных в пробах влагалищно-цервикальной слизи коров
Классификационная схема Alexopoulos et al., 1996
Тип Zygomicota Порядок Mucorales Семейство Mucoraceae Род Mucor Вид Mucor racemosus Fresenius Mucor ramosissimus
R. microsporum var rhizopodiformus
Тип Ascomycota Порядок Eurotiales Семейство Trichocomaceae Aspergillus fumigatus Fresenius Aspergillus nidulans Aspergillus flavus Link Aspergillus niger van Tieghem Порядок Dothideales Семейство Pleosporacea Alternaria alternata Keissler
Классификационная схема G.C.Ainsworth (1971) Отдел Eumycota Подотдел Deuteromycotina Класс Blastomycetes Род Candida Вид Candida albicans
От коров с нормальным течением послеродового периода были выделены грибы из рода Aspergillus , Mucor , Candida , которые относятся к видам A. flavus , или Mucor racemocus, или Candida albicans . У коров с послеродовыми осложнениями встречается несколько видов грибов: M. racemosus , M. ramosissimus , Rhizopus microsporum var rhizopodiformus , A. fumigatus Fresenius , A. nidulans , A. flavus Link , A. niger . Полученные данные указывают на роль грибов как возбудителей вагинальных инфекций.
3.5. Идентификация бактерий рода Bacillus , выделенных из микрофлоры влагалища коров
В целях дальнейшего изучения микрофлоры воспроизводительных органов нами проведена идентификация спорообразующих аэробных бактерий, которые доминируют в количественном отношении в микробиоценозе половых органов коров в условиях Якутии. Получены чистые культуры спорообразующих аэробных бактерий, выделенных от влагалищно-цервикальной слизи коров в норме и с послеродовыми осложнениями. Всего выделено 19 штаммов. В основу схемы идентификационных признаков положены принципы, изложенные в работах R. Gordon (1973), автора систематики бактерий рода Bacillus.
Для определения свойств выделенных штаммов бактерий рода Bacillus использовали 5-суточные агаровые культуры. Подвижность наблюдали в препарате «висячая капля». Для изучения продукции каталазы применяли 10 %-ную перекись водорода. Продукцию лецитиназы установили на МПБ с яичным желтком. Образование оксидазы определяли с помощью индикаторных тестов. Гидролиз казеина изучали на молочном агаре, а гидролиз крахмала – на картофельном агаре. Для постановки реакции Фогес-Проскауера культуры выращивали на среде Кларка. Также проводили посев на среды с сахарами.
Результаты представлены в таблице 4. Все выделенные 19 штаммов бактерий рода Bacillus – палочковидные бактерии, аэробы, которые образуют споры, положительно окрашиваются по Граму. Как показывают данные исследований, все штаммы подвижны, продуцируют каталазу, при росте на МПА почти все выдерживают присутствие хлористого натрия до 7 %, не образуют лецитиназу и несколько отличаются по гидролизу крахмала, разложению казеина, образованию оксидазы и ацетилметилкарбинола и по разложению ряда сахаров. На основании результатов изучения физиолого-биохимических свойств распределены по видам.
Известно, что виды бактерий рода Bacillus распределены в три морфологические группы. От коров с нормальным течением родового и послеродового периода выделены: Bac. megaterium , Bac. pumilis , Bac. coagulans , Bac. firmus , Bac. laterosporus , Bac. brevis , Bac. alvei . Из них 52,6 % относятся к I группе, и 42,1 % к II группе. От коров с послеродовыми осложнениями выделены: Bac. coagulans , Bac. pumilis , Bac. laterosporus , Bac. alvei , Bac. stearothermophilus . Из них 71,4 % относится к II группе, 14,2 % – к I группе.
Обобщение полученных данных показывает, что от здоровых коров выделены бактерии рода Bacillus (в количественном отношении), в основном относящиеся к I группе (52,6 %), а от больных – к II группе (71,4 %).
