этапах исследований был исключен в качестве сорбента сапропель как совершенно не обладающий адсорбирующими свойствами.
В ходе опыта установили, что 20 г цеолита адсорбирует 20 мл концентрированного препарата «Сахабактисубтил» (40 доз), а 20 г комбикорма адсорбирует 30 мл, или 60 доз препарата.
В результате опытов выяснено, что при ИК-с с температурой 90ºС и экспозиции 15 минут микробные клетки пробиотика в цеолите сохраняются только до 55,3 %, а в комбикорме – до 70,5 % от исходного содержания (таблица 14).
Таблица 14.
Сохранность микробных клеток пробиотика «Сахабактисубтил» в 1 г сорбента
| Вид сорбента-носителя | ИК-с при t=90º 15 | С экспозиция минут | % сохранности |
|---|---|---|---|
| Кол-во м.к | Кол-во м.к | м.к. | |
| до опыта | после опыта | ||
| Цеолит + пробиотик | 1300 млрд | 720 млрд | 55,3 % |
| Комбикорм + пробиотик | 1700 млрд | 1200 млрд | 70,5 % |
Следовательно, наиболее перспективным сорбентом-носителем является комбикорм.
В дальнейшем проведены опыты по разработке режимов ИК-с, обеспечивающих обезвоживание пробиотика на комбикорме с максимальным сохранением исходного содержания микробных клеток в пробиотике.
ИК-с применяли при температурах –45º, 60º, 65º, 75º, 80ºС при экспозициях 15, 30 минут (таблица 15).
Таблица 15.
Результаты инфракрасной сушки пробиотика «Сахабактисубтил»
| № п/п | Температуры ИК-с (вºС) | Результаты при экспозиции | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 15 мин. | 30 мин. | ||||
| консистенция | % сохр. м.к | консистенция | % сохр. м.к | ||
| 1. | 45 | влажная | – | влажная | – |
| 2. | 60 | влажная | – | влажная | – |
| 3. | 65 | влажная | – | влажная | – |
| 4. | 75 | чуть влажная | 99,4 % | сухая | 99,3 % |
| 5. | 80 | чуть влажная | 99,3 % | сухая | 98,5 % |
Одновременное сочетание обезвоживания и сохранения содержания микробных клеток в пробиотике «Сахабактисубтил» на комбикорме достигнуто при ИК-с с температурой 75ºС и экспозиции 30 минут. Для бактерий рода Bacillus температура до 80ºС не является губительной, а, наоборот, оптимальной и используется при предпосевной обработке для дифференциации от других микроорганизмов.
Полученный в результате ИК-с пробиотик «Сахабактисубтил» на комбикорме в 1 г содержит 150 млрд м. к (или 3 дозы препарата). По результатам исследований получен патент РФ на изобретение «Способ получения сухой формы микробного препарата» (№ 2346032, 2009 г.) [157].
4.5. Применение пробиотика «Сахабактисубтил» после ИК-сушки стельным коровам
Опыт был проведен за 3-4 месяца до отела на 47 стельных коровах, принадлежащих ОПХ «Покровское», в период зимнего стойлового содержания – с декабря по март.
Пробиотик «Сахабактисубтил» для перорального применения стельным коровам использовали после ИК-сушки. Коровам опытной группы (25 гол.) индивидуально давали препарат (150 млрд м.к.) перорально с комбикормом по 5 г 1 раз в день в течение 10 дней каждого месяца. Применяли 3 месяца подряд до отела. Коровам контрольной группы (22 гол.) препарат не давали. За животными вели наблюдение. После опыта у отелившихся коров опытной и контрольной групп брали влагалищно-цервикальную слизь, кровь и кал. В опытной группе заболела эндометритом 1 гол. (4 %), в контрольной группе заболели 3 гол. (13,6 %). В опытной группе сервис-период составил 67,8 дня, а в контрольной группе – 76,2 дня. Продолжительность сервис-периода у коров в опытной группе сократился на 8,4 дня по сравнению с контрольной группой.
Следует отметить, что в предыдущие годы (2004-2006 гг.) заболеваемость эндометритом составляла 14-22,9 % (таблица 16).
Таблица 16.
Заболеваемость эндометритом коров в ОПХ «Покровское»
(2004-2006 гг.)
| Годы | 2004 | 2005 | 2006 |
|---|---|---|---|
| Количество коров (гол.) | 140 | 150 | 160 |
| Заболело эндометритом (гол.) | 32 | 21 | 23 |
| в % | 22,9 % | 14 % | 14,4 % |
При исследовании после отела вагинально-цервикальной слизи коров, не принимавших препарат, зарегистрированы явления дисбактериоза: отсутствие лакто- и бифидобактерий, присутствие токсигенных грибов, таких как A. niger , A. fumigatus , A. flavus , A. nidulans , патогенных стафилококков (600,0±12,0 тыс. м.к.), увеличение количества эшерихий (14,02±0,67 тыс. м. к.) в 1,31 раза, энтерококков (3,65±0,33 тыс. м.к.) – в 3,92 раза. У коров, принимавших препарат, зарегистрирован наиболее оптимальный вагинальный микробиоценоз: отсутствие вышеперечисленных токсигенных грибов, кроме Candida paraplilosus , повышение количества спорообразующих бактерий (19,37±0,93 тыс. м.к.) – в 2,28 раза, появление бифидо- и молочнокислых бактерий (таблица 17).
Таблица 17.
Вагинальный микробиоценоз коров после перорального применения пробиотика «Сахабактисубтил»
| п/п | Выделенные микроорганизмы | Кол-во микроорганизмов (тыс. КОЕ в 1 мл слизи) | |
|---|---|---|---|
| Опытная группа (M±m) | Контрольная группа (M±m) | ||
| 1. | Лактобактерии | 1,6±0,03 | 0 |
| 2. | Бифидобактерии | 1х103 | 0 |
| 3. | Эшерихии | 10,66±0,85 | 14,02±0,67 |
| 4. | Энтерококки | 0,93±0,050 | 3,65±0,33 |
| 5. | Спорообразующие бактерии | 19,37±0,93 | 8,46±0,38 |
| 6. | Протеи | + | + |
| 7. | Стафилококки | 0 | 600,0±12,0 |
| 8. | Грибы | Candida paraplilosus | A. niger, A.fumigatus, A.flavus, A.nidulans |
У коров опытной группы при пероральном применении пробиотика «Сахабактисубтил» в кишечной микробиоте заметно увеличиваются представители нормофлоры: количество лактобактерий (2,59±0,005 тыс. КОЕ в 1 г фекалий) – в 3 тысячи раз, бифидобактерий также на 2 порядка выше, чем в контрольной группе. Также повышается количество спорообразующих бактерий (35,33±2,15 тыс. КОЕ) – в 4 раза, лактозоположительных эшерихий (63,51±0,26 тыс. КОЕ) – в 6 раз по сравнению с контрольной группой. В кишечной микробиоте опытной группы следует отметить значительное снижение потенциальных энтеропатогенов – лактозонегативных эшерихий (9,20±0,13 тыс. КОЕ) – в 1,5 раза и токсигенных грибов (таблица 18).
