3.5. Идентификация бактерий рода Bacillus , выделенных из микрофлоры влагалища коров
В целях дальнейшего изучения микрофлоры воспроизводительных органов нами проведена идентификация спорообразующих аэробных бактерий, которые доминируют в количественном отношении в микробиоценозе половых органов коров в условиях Якутии. Получены чистые культуры спорообразующих аэробных бактерий, выделенных от влагалищно-цервикальной слизи коров в норме и с послеродовыми осложнениями. Всего выделено 19 штаммов. В основу схемы идентификационных признаков положены принципы, изложенные в работах R. Gordon (1973), автора систематики бактерий рода Bacillus.
Для определения свойств выделенных штаммов бактерий рода Bacillus использовали 5-суточные агаровые культуры. Подвижность наблюдали в препарате «висячая капля». Для изучения продукции каталазы применяли 10 %-ную перекись водорода. Продукцию лецитиназы установили на МПБ с яичным желтком. Образование оксидазы определяли с помощью индикаторных тестов. Гидролиз казеина изучали на молочном агаре, а гидролиз крахмала – на картофельном агаре. Для постановки реакции Фогес-Проскауера культуры выращивали на среде Кларка. Также проводили посев на среды с сахарами.
Результаты представлены в таблице 4. Все выделенные 19 штаммов бактерий рода Bacillus – палочковидные бактерии, аэробы, которые образуют споры, положительно окрашиваются по Граму. Как показывают данные исследований, все штаммы подвижны, продуцируют каталазу, при росте на МПА почти все выдерживают присутствие хлористого натрия до 7 %, не образуют лецитиназу и несколько отличаются по гидролизу крахмала, разложению казеина, образованию оксидазы и ацетилметилкарбинола и по разложению ряда сахаров. На основании результатов изучения физиолого-биохимических свойств распределены по видам.
Известно, что виды бактерий рода Bacillus распределены в три морфологические группы. От коров с нормальным течением родового и послеродового периода выделены: Bac. megaterium , Bac. pumilis , Bac. coagulans , Bac. firmus , Bac. laterosporus , Bac. brevis , Bac. alvei . Из них 52,6 % относятся к I группе, и 42,1 % к II группе. От коров с послеродовыми осложнениями выделены: Bac. coagulans , Bac. pumilis , Bac. laterosporus , Bac. alvei , Bac. stearothermophilus . Из них 71,4 % относится к II группе, 14,2 % – к I группе.
Обобщение полученных данных показывает, что от здоровых коров выделены бактерии рода Bacillus (в количественном отношении), в основном относящиеся к I группе (52,6 %), а от больных – к II группе (71,4 %).
Следует отметить, что идентификация спорообразующих аэробных бактерий в микрофлоре половых путей здоровых и больных эндометритами коров в условиях Якутии не показывает существенной разницы в видовом составе бактерий рода Bacillus .
3.6. Антибиотикоустойчивость бактерий рода Bacillus , выделенных из влагалищно-цервикальной слизи коров
В опытах по изучению антибиотикоустойчивости испытали чувствительность 19 штаммов бактерий рода Bacillus , выделенных из влагалищно-цервикальной слизи коров, к разным видам антибиотиков, относящихся к группе: полипептиды (полимиксин), аминогликозиды (канамицин, неомицин), цефалоспорины (цефоперазон, цефуроксин), нитрофураны (фурадонин), тетрациклины (тетрациклин).
Для этого выделенные штаммы бактерий рода Bacillus выращивали на мясопептонном бульоне в течение 5 суток при 37ºС. После фильтрации и смешивания в равных количествах с агаром разливали стерильно в чашки Петри. На застывший агар накладывали диски из антибиотиков, затем помещали в термостат при 37ºС и через 24 часа учитывали результат. Данные отражены в таблице 5. Результаты антибиотикоустойчивости штаммов судили по зоне ингибиции роста вокруг дисков с антибиотиками. Зона ингибиции роста бактерий свыше 10 мм определяет чувствительность к антибиотику, зона меньше 10 мм показывает нечувствительность. Штаммы спорообразующих аэробных бактерий, выделенных из микрофлоры влагалища коров с нормальным отелом и послеродового периода, в основном на 72,7 %-100 % антибиотикоустойчивы, наиболее чувствительны только к ципрофлоксацину и неомицину. Штаммы, выделенные от коров с послеродовыми осложнениями, более чувствительны к воздействию антибиотиков из группы амино¬гликозидов и цефалоспоринов.
Спорообразующие аэробные бактерии рода Bacullus, выделенные из микрофлоры влагалища больных коров, чувствительны к неомицину, ципрофлоксацину, также избирательно – к канамицину и цефоперазону. Обладают устойчивостью к цефуроксину, а также полимиксину, что является их родовой особенностью.
